緒論：寫作既是個人情感的抒發(fā)，也是對學術(shù)真理的探索，歡迎閱讀由發(fā)表云整理的11篇春節(jié)標語范文，希望它們能為您的寫作提供參考和啟發(fā)。

篇（1）

3. 歡天喜地迎新春，尊老愛幼促和諧!

4. 裝點天下商通四海，業(yè)精于勤日日高升!

5. 貫徹落實科學發(fā)展觀，建設(shè)文明和諧新xx!

6. 文明過新年，快樂每一天!

7. 弘揚傳統(tǒng)美德，建設(shè)和諧社會!

8. 堅定發(fā)展信心，鼓足超越勇氣，推動發(fā)展!

9. 建設(shè)文明和諧新xx，再創(chuàng)xx新輝煌!

10. 群策群力，迎難而上，推動經(jīng)濟社會持續(xù)健康發(fā)展!

11. 開拓創(chuàng)新，與時俱進，科學發(fā)展，安全發(fā)展，轉(zhuǎn)型發(fā)展，跨越發(fā)展!

12. 恭祝全體員工及家屬新春快樂、闔家幸福!

13. 以我文明新貌，喜迎文明盛會!

14. 搶抓新機遇，增創(chuàng)新優(yōu)勢，再創(chuàng)新輝煌!

15. 牢固確立科學發(fā)展觀，在科學發(fā)展中率先發(fā)展!

16. 深入解放思想，推動科學發(fā)展，共鑄改革輝煌，同享發(fā)展碩果!

17. 解放思想開拓創(chuàng)新 為建設(shè)富有魅力的現(xiàn)代化企業(yè)而努力奮斗!

18. 牢固確立科學發(fā)展觀，在科學發(fā)展中率先發(fā)展

19. 匯聚百川、服務兩港、創(chuàng)新開拓、勇立潮頭

20. 搶抓新機遇，增創(chuàng)新優(yōu)勢，再創(chuàng)新輝煌

21. 裝點天下商通四海，業(yè)精于勤日日高升

22. 年年歲歲花不同，歲歲朝朝人依在

23. 搶抓新機遇，爭創(chuàng)新優(yōu)勢，再創(chuàng)新輝煌

24. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇

25. 張燈結(jié)彩歡度佳節(jié)，齊心協(xié)力共創(chuàng)偉業(yè)城市，讓生活更美好

26. 堅持科學發(fā)展和諧發(fā)展，努力把xx建設(shè)成為民富區(qū)強、文明和諧的現(xiàn)代化xx新城

27. 建設(shè)社會主義新農(nóng)村，共創(chuàng)xx美好家園

28. 堅持黨的群眾路線，全心全意為人民服務

29. 新年伊始，向各行各業(yè)的建設(shè)者致敬

30. 新年快樂,佳節(jié)如意!

31. 歡度春節(jié)，祝福萬家

32. 迎新年，講文明，樹新風，促和諧

33. 以科學發(fā)展觀統(tǒng)領(lǐng)全局，推動xx經(jīng)濟社會又好又快發(fā)展

34. 世界文明的盛會，我們大家的世博

35. 以我文明新貌，共慶新春佳節(jié)，喜迎世博盛會

36. 文明的城市、歡慶的佳節(jié)，美好的生活

37. 在新的一年新的開始新的起點新的征程

38. 年年順景財源廣歲歲平安福壽多

39. 與時俱進弘揚xx精神，萬眾一心構(gòu)建和諧港城

40. 耄耊之年，風采猶存!富如東海，壽比南山!

41. 運籌帷幄雄心開創(chuàng)千秋業(yè) 達權(quán)知變妙筆描繪萬代春

42. 大吉大利過新年，事業(yè)成功輝煌年!

43. 匯聚百川、服務兩港、創(chuàng)新開拓、勇立潮頭

44. 一干二凈除舊習五講四美樹新風

45. 春色明媚山河披錦繡華夏騰飛祖國萬年輕

46. 五更分兩年年年稱心一夜連兩歲歲歲如意

47. 求真務實抓轉(zhuǎn)型，全心全力搞跨越!

篇（2）

2. 春色明媚山河披錦繡華夏騰飛祖國萬年輕

3. 五更分兩年年年稱心一夜連兩歲歲歲如意

4. 求真務實抓轉(zhuǎn)型，全心全力搞跨越!

5. 祝各位在新的一年里：身體健康，萬事如意!

6. 一干二凈除舊習五講四美樹新風

7. 聚精會神搞建設(shè)，一心一意謀發(fā)展

8. 喜迎猴年!歡度新年!再接再勵!再創(chuàng)輝煌!

9. 歡天喜地迎新春，尊老愛幼促和諧!

10. 文明過新年，快樂每一天!

11. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇

12. 張燈結(jié)彩歡度佳節(jié)，齊心協(xié)力共創(chuàng)偉業(yè)城市，讓生活更美好

13. 新年伊始，向各行各業(yè)的建設(shè)者致敬

14. 群策群力，迎難而上，推動經(jīng)濟社會持續(xù)健康發(fā)展!

15. 開拓創(chuàng)新，與時俱進，科學發(fā)展，安全發(fā)展，轉(zhuǎn)型發(fā)展，跨越發(fā)展!

16. 恭祝全體員工及家屬新春快樂、闔家幸福!

17. 建設(shè)社會主義新農(nóng)村，共創(chuàng)xx美好家園

18. 堅持黨的群眾路線，全心全意為人民服務

19. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇!

20. 堅持科學發(fā)展和諧發(fā)展，努力把xx建設(shè)成為民富區(qū)強、文明和諧的現(xiàn)代化xx新城

2017年歡度春節(jié)宣傳標語（簡單篇）

1. 春滿人間民泰安。

2. 人壽年豐喜事多。

3. 神駒騰躍吉祥年。

4. 梅花香遍神州地。

5. 堅持科學執(zhí)政民主執(zhí)政依法執(zhí)政，全力構(gòu)建和諧社會。

6. 山青水秀風光好。

7. 慶佳節(jié)，創(chuàng)新業(yè)，奪取全市改革開放和現(xiàn)代化建設(shè)新勝利。

8. 歡歡喜喜過節(jié) 平平安安過節(jié)

9. 新年伊始，向各行各業(yè)的建設(shè)者致敬

10. 過歡樂春節(jié) 文明春節(jié) 做文明市民

11. 歡度春節(jié)，祝福萬家

12. 辭舊迎新 來年更上一層

13. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇。

14. 瑞雪映兆豐稔歲。

15. 牢固確立科學發(fā)展觀，在科學發(fā)展中率先發(fā)展。

16. 笛弄梅花曲。

17. 華人歡度萬榮春。

18. 龍族喜迎千禧歲。

19. 瑞雪兆豐年。

20. 鶯歌綠柳樓前。

21. 政協(xié)人和天地春。

22. 跨越江河架宏橋。

23. 東風迎新歲。

24. 兔降葡旗別澳門。

25. 龍游滄海江湖小。

26. 文明過新年，快樂每一天!

27. 歡天喜地迎新春，尊老愛幼促和諧!

篇（3）

3、推動移風易俗，樹立文明鄉(xiāng)風。

4、節(jié)儉是良知，“光盤”是美德。

5、勤儉節(jié)約不能忘，鋪張浪費要摒棄。

6、唯誠唯信行世事，克儉克勤踐家風。

7、相親相愛家庭和睦，互諒互幫鄰里溫馨。

8、行路看紅燈，垃圾不亂扔，坐車讓老人，處處講文明。

9、走文明路，開文明車，做文明人，創(chuàng)文明城。

10、一路禮讓一路行，一路文明一路情。

11、一花一木皆是景，一言一行要文明。

12、樹立環(huán)境保護意識，建設(shè)綠色文明家園。

篇（4）

3、我會給你送一個不同平日的祝福，因為這四字一年只說一次：元旦快樂!

4、千萬要平安！我深感明白，偶前面的路艱難而又漫長，我不可能也沒有時間來回報你們的那份牽掛和關(guān)愛。

5、新的一年，希望你財富賊多，事業(yè)賊火，身體賊棒，家庭賊旺，一切賊順，雞年賊牛!

6、恭祝春節(jié)快樂。祝你年年圓滿如意，月月事事順心，日日喜悅無憂，時時高興歡喜，刻刻充滿朝氣!

7、愛情的基礎(chǔ)，是勇氣；友情的基礎(chǔ)，是義氣；親情的基礎(chǔ)，是和氣；生活的基礎(chǔ)，是喜氣；祝福的基礎(chǔ)，是豪氣；新年到，愿你事業(yè)有財氣，快樂有福氣！

8、又饞了吧，新年喝一盅吧!要知道母親有一個不肯哭、不肯服輸、不示弱的女兒，要想用她所有的心血換回一份安閑平穩(wěn)的將來，借此來報效蒼老多病的雙親和冀我以希望的姐妹親朋。

9、快樂時有你的祝福，失意時有你的安撫，遇到你是我的幸福，人生有你我已知足，在新的一年里，讓我們共同來祝福彼此，新年快樂!

10、分別幾日，新春到來。愿領(lǐng)導春節(jié)一切好，接福納財心歡笑。 春節(jié)到了，想想沒什么送給你的，又不打算給你太多，只有給你五千萬：千萬快樂！

11、煩惱憂愁不再來，福星財神相對拜。新年快樂，恭喜發(fā)財！短信祝福，依依情在。

12、千萬不要忘記我！ 大地回暖春節(jié)來，小橋流水百花開。人壽年豐又一春，生活美滿笑顏開。

13、或許給您拜年的人已經(jīng)排成了長隊，新年到放鞭炮，拱拱手祝福好，身體棒樂陶陶，事業(yè)成薪水高，夫妻間分紅包，兄弟間酒不少，敬長輩送補藥，會親友真熱鬧，送舊符展新貌，春節(jié)樂天天笑!

14、駛?cè)肫桨部鞓返溃蔬^吉祥如意河。馬年來，馬年嗨，蛇年祝福最精彩，愿你如馬般舞出自己的錦繡前程，如馬般游出自己的甜美愛情，如馬般點燃自己的美麗心情。

篇（5）

中圖分類號：I053.5

文獻標志碼：A文章編號：1009－4474(2012)04－0043－05

The Cultural Symptoms and Decoding of Youth Idol Drama

——Analysis Based on the Theory of John Fiske

YAN Qing， ZHU Jing-wen

(Department of Literature and Journalism, Sichuan University, Chengdu 610064, China)

Key words: Youth Idol Drama; John Fiske; ideologies; ideograph; intertextuality; Post Modernism

Abstract: Youth Idol Drama as a type of TV play closely interacts with business and economic logic, and its artistic generation and acceptance are both deeply influenced by the post modernism thoughts. In the light of John Fisks Symbol theory, TV “bardic” ideographic theory, intertextuality theory of horizontal and vertical dimensions and so on, the creation and acceptance of the Youth Idol Drama can be interpreted as the ideology knitted with the illusion of the reality. In the dissemination, the selection of strategy for daily visual bardic is to be made through the audiences individual decoding in the acceptance and the visual spectacle and entertainment carnival of the Youth Idol Drama are thus completed.

青春偶像劇（以下簡稱偶像劇）是電視劇藝術(shù)中受商業(yè)邏輯和經(jīng)濟邏輯影響最深刻的類型，是后現(xiàn)代體驗下生活鏡像和意義建構(gòu)的獨特形態(tài)。偶像劇以時尚性、奇異性表征系統(tǒng)將受眾定位于追新求異的青少年人群，并力圖通過電視劇文本符碼的日常化影像編織將現(xiàn)實的意識形態(tài)最大化呈現(xiàn)。費斯克用符號學原理剖析電視（節(jié)目）文本，闡釋了電視用符碼來建構(gòu)意義，并將生產(chǎn)者、文本和觀眾三者勾連起來，實現(xiàn)了從意義的建構(gòu)到符碼表意的視像傳播，再到受眾的個性化解碼的動態(tài)而開放的意義生態(tài)圈和循環(huán)系統(tǒng)，為偶像劇的傳播理念、意義編織和接受等提供了新穎的視角和理論價值。

一、意識形態(tài)的編織和幻化呈現(xiàn)

偶像劇運用符碼單位構(gòu)建青少年日常生活情境的敘事文本，以電視媒介為傳播載體進行一種視像化的意義傳達，最終通過一系列視像化的符碼表意和隱喻完成了文本意義的游移升華。費斯克在《解讀電視》、《電視文化》等著作中巧妙地將索緒爾、巴特等人的符號理論融入電視媒介，創(chuàng)造性地將電視符碼分為了“現(xiàn)實”、“表現(xiàn)”和“意識形態(tài)”三個等級。

在第一層級“現(xiàn)實”中，符碼代表了其初始意義，亦即索緒爾符號學中的“能指”效用。偶像劇中這些符碼取自現(xiàn)實客觀世界，是受眾熱捧事物的擇取，如青春靚麗的俊男美女、時尚多變的服飾妝容、現(xiàn)代化的都市建筑等。“現(xiàn)實”層面的電視劇符碼所建構(gòu)的影視文本盡管只是對現(xiàn)實世界的部分選擇，但是在一定程度上實現(xiàn)了視像的真實性，滿足了電視受眾的日常化觀賞訴求。湖南衛(wèi)視自拍劇《一起來看流星雨》中的男女主角就均為戲劇學院的本科學生，沒有明星光環(huán)的他們與普通的青少年受眾縮短了距離，因此他們的出場就更像是校園親歷而非表演。美國偶像劇《緋聞女孩》中，現(xiàn)代都市風貌的符碼較之中韓兩國更為突出，無論是男女主角居住的豪華別墅或商務樓，還是舞會派對中豪華的廳堂裝潢，抑或配合情節(jié)呈現(xiàn)的風景勝地，無不以攝像機為眼、電視為介來完成敘事文本符碼的建構(gòu)。

第二層級的“表現(xiàn)”是通過技術(shù)使日常符碼的表意上升到文化層次——在社會共享符碼的關(guān)聯(lián)下形成了偶像劇的符號所指。這種通過技術(shù)形成的敘事文本可以稱為技術(shù)符碼，包括攝像技術(shù)的運用，如鏡頭寫意、畫面剪輯、聲畫效果等，可以更好地完成“現(xiàn)實”層面日常符碼表意的提升。偶像劇中技術(shù)符碼的運用主要體現(xiàn)為聲畫演繹人物性格、鏡頭寫意軀體和類軀體鏡像、畫面營造都市幻象三個方面。首先，聲畫演繹人物性格是通過聲音和畫面的運用來實現(xiàn)符碼表意的深化，將俊男美女視像化的日常符碼表意提升到了無法用語言表達的內(nèi)心層面。偶像劇的對白和音樂，無論是幽默風趣還是詩意唯美，都充分運用了語言內(nèi)在的戲劇張力，營造輕松浪漫的氛圍，積淀觀影情緒，從而推動情節(jié)的發(fā)展和人物塑造。《緋聞女孩》就借用當紅歌星Lady Gaga的歌曲作為影片的背景音樂，從而有效地提升了劇作的時尚性和流行度。其次，鏡頭寫意軀體和類軀體鏡像是指用鏡頭語言如特寫或者推拉搖移等來突出劇中人物軀體和類軀體的視覺呈現(xiàn)，由此來建構(gòu)偶像劇特有的視覺化、時尚化、都市化的青春幻象。軀體鏡語是指身體包括人物神態(tài)、動作、裝扮等在內(nèi)的人物形象的呈現(xiàn)，它是以人物靚麗的容貌、完美的身材和時尚的裝扮來塑造偶像的崇高地位的。再次，畫面營造都市幻象則是通過畫面的剪輯技巧輔以鏡頭語言來完成都市幻象，如酒吧、豪華餐廳、星級酒店等營造出偶像劇的背景環(huán)境，為偶像劇塑造夢幻卻又高度仿真的環(huán)境現(xiàn)場。而韓國偶像劇《拜托小姐》中女主角居住的豪宅、休閑娛樂的高爾夫球場、辦公的豪華商務大樓則成為了偶像劇的類軀體敘事，在輔助軀體敘事的同時交代環(huán)境背景，其營造的都市幻象一方面為達成受眾的情感共鳴做鋪墊，另一方面則通過這種高度物質(zhì)化、視像化的呈現(xiàn)方式達到陌生化效果，為受眾崇拜心理的激發(fā)劃定了最佳的觀賞距離。無論是軀體鏡語還是類軀體鏡語，在偶像劇中都成為滿足受眾偶像崇拜訴求的最佳話語呈現(xiàn)方式，也成為了建構(gòu)消費景觀、擬造超仿真社會的最佳路徑。

第三層級的“意識形態(tài)”架構(gòu)于“現(xiàn)實”能指與“表現(xiàn)”所指共同塑造的符碼意指之上，是一種高于文化層面的世界觀、價值觀的符碼表意。偶像劇的“意識形態(tài)”主要以電視文本符碼的隱喻、轉(zhuǎn)喻等方式體現(xiàn)地域文化差異，在潛移默化中形成獨特的意識形態(tài)符碼，有利于受眾的識別進而引發(fā)共鳴。中國偶像劇在含蓄委婉的敘事文本符碼、相對保守的軀體符碼中充盈了進取向上的精神。比較有代表性的影片《奮斗》，沒有夢幻的童話情節(jié)，但同樣敘寫了青年一代青春激昂的奮斗與情感歷程。即使是陷入偶像劇套路的《一起來看流星雨》等劇，與相同題材的韓國版、日本版《花樣少男少女》相比，也同樣少了夢幻，而多了對現(xiàn)實生活的寫照與人物成長軌跡的描繪。韓國偶像劇在軀體符碼上突出的表現(xiàn)則從側(cè)面烘托出韓國當下明顯的消費轉(zhuǎn)向痕跡，《浪漫滿屋》、《加油小姐》、《咖啡王子一號店》等韓國偶像劇無一例外地都塑造了完美靚麗、時尚與智慧并存的男女主角，他們從服飾到妝容搭配都成為了潮流時尚的引領(lǐng)者，無不刺激著受眾的消費欲望。在韓劇所營造的時尚帝國中，人們似乎必須消費才能生存。美國的偶像劇在都市環(huán)境營造上的技術(shù)優(yōu)勢，傳達了其以現(xiàn)代化為誘餌的霸權(quán)文化的滲透效果。高聳云端的商務寫字樓、開闊堂皇的私家別墅、豪華奢侈的購物廣場……現(xiàn)代化都市的一切標記對于任何一個非美國人來說都很常見，而《緋聞女孩》中呈現(xiàn)的男女青年之間直白的亂性、物欲橫流的社會風貌以及非人性的暴力沖突仍舊在不遺余力地傳達一種美國式生活方式，不管這種奢靡混亂的生活方式是多么地不堪。

二、日常生活的后現(xiàn)代表達與傳播

在費斯克看來，電視具備的“吟詠功能”(bardic function)順利實現(xiàn)了敘事文本的傳遞。電視的吟詠功能類似于中世紀的游吟詩人的作用——“利用既有語言把當時社會的生活作息，整理組織出一套又一套的故事或訊息，并強化肯定了聽者對自己以及對自己文化的感受。”〔1〕在當下后現(xiàn)代思潮的背景下，電視的“吟詠功能”對人們的身份認同和文化歸屬發(fā)揮了重要作用。所謂后現(xiàn)代，是一個相對于現(xiàn)代性的概念，但是這種概念并非在時間、序列上進行區(qū)別〔2〕。在此我們更多的是將后現(xiàn)代看為一種對世界的態(tài)度，一種思考和感受的方式或行為，它質(zhì)疑客觀真理、理性、同一性和客觀性等，不信任任何單一的理論框架、大敘事或終極性解釋。而電視的“吟詠功能”是在題材選擇、符號修辭、傳播技術(shù)等后現(xiàn)代認可的基礎(chǔ)上實現(xiàn)傳播與接受的。

在題材選擇上，偶像劇通過對經(jīng)典文本的“后現(xiàn)代摹寫”鎖定文化范圍，奠定收視根基。作為20世紀以來的重要文化現(xiàn)象，偶像劇的創(chuàng)作深受后現(xiàn)代思潮的影響，在表達方式上呈現(xiàn)出明顯的后現(xiàn)代傾向——在內(nèi)容上對經(jīng)典文本的創(chuàng)造性摹寫與在形式上對經(jīng)典文本的模仿、拼貼，借經(jīng)典文本的受眾基礎(chǔ)為新的偶像劇預設(shè)收視期待。經(jīng)典文本的后現(xiàn)代摹寫，是借鑒利用經(jīng)典文本中的素材，根據(jù)現(xiàn)代青少年群體的審美標準和創(chuàng)作者的傳播需求來進行篩選、加工創(chuàng)作全新的電視劇本。改寫后的偶像劇擯棄了經(jīng)典文本中深刻的思想內(nèi)涵，力求以通俗、淺顯的方式達到最優(yōu)化的定位傳播。法國后現(xiàn)代主義代表人物里奧塔爾曾將后現(xiàn)代主義定義為“針對元敘事的懷疑態(tài)度”〔3〕。而偶像劇的受眾被定位為一群勇于接受新思潮、敢于顛覆傳統(tǒng)的青少年人群，該劇種的訴求本身就含有對元敘事持懷疑、顛覆以至批判的態(tài)度，因此，偶像劇在題材的選取、內(nèi)容的表達上即完成了一次對于傳統(tǒng)經(jīng)典文本的顛覆性再創(chuàng)作。韓國人氣偶像劇《豪杰春香》通過對韓國家喻戶曉的傳統(tǒng)故事《春香傳》的改寫，在內(nèi)容和形式兩個層面上創(chuàng)新了表達方式，消解了傳統(tǒng)敘事中朝鮮人民贊頌女主人公剛強不屈的美好品質(zhì)而抨擊貴族階級驕奢逸的封建主義腐朽統(tǒng)治這一宏大主題，在將題材簡化為一女兩男的情感糾葛的同時完成了電視劇與后現(xiàn)代語境的充分契合。

此外，創(chuàng)作者通過對經(jīng)典作品的經(jīng)典細節(jié)的模仿與拼貼，對偶像劇在表述形式上進行后現(xiàn)念的藝術(shù)加工，完成了經(jīng)典作品的差異化表達。如臺灣偶像劇《流星花園》在當時掀起了偶像劇的收視狂潮，盡管該劇是由日本的漫畫《花樣男子》改編，但改編后的電視劇所獲得的成功遠遠超過了原有漫畫所引發(fā)的追捧效果，開創(chuàng)了偶像劇中一種王子與灰姑娘式的“經(jīng)典模式”，之后日本、韓國、中國的偶像劇都紛紛翻拍和效仿。如《流星花園》中帥氣的四大男主角F4的出場：多輛豪華轎車在一輛開路車引導下駛?cè)肓诵@，學校的老師同學紛紛夾道歡迎，其氣氛絲毫不亞于明星的閃亮登場。這一成功的偶像塑造畫面在《花樣男子》、《一起來看流星雨》中都有類似的呈現(xiàn)。

在符號修辭上，偶像劇借助消費奇觀構(gòu)造價值認同，以電視為媒介通過偶像塑造來傳播都市文化，引導社會的消費價值走向。從索緒爾所揭示的“符號社會”到鮑德里亞所描繪的“消費社會”，青春偶像劇就是這一語境下的產(chǎn)物。

一方面，偶像劇的偶像呈現(xiàn)不僅是其類型特征所在，更是以此架構(gòu)的消費幻境。偶像劇在偶像塑造方面的特質(zhì)不僅鞏固了青少年追逐前沿、緊跟社會潮流這類受眾群體，而且在轉(zhuǎn)型社會缺乏偶像的社會風潮中也為其擴大受眾基礎(chǔ)奠定了社會文化根基。偶像在偶像劇中是最具傳播價值的符號之一，“偶像”的能指即指劇中的主要角色形象，而其所指則指對該人物自內(nèi)而外全方位的闡釋，比如內(nèi)涵修養(yǎng)、儀表妝容等，這種表意形式成為偶像劇奇觀建構(gòu)的基礎(chǔ)和受眾訴求表達的最佳方式。韓劇的盛行在很大程度上得益于偶像符號意指的最大化拓展，它為整個影視奇觀的建構(gòu)奠定了絕佳的消費根基。以《浪漫滿屋》為例，劇中偶像主要有女主角宋慧喬和男主角Rain，電視劇通過服裝、化妝、發(fā)飾等等一系列人物外形符號塑造了兩個時尚、俊美卻又不失現(xiàn)實傳統(tǒng)的偶像，讓觀眾在接納人物的同時不自覺地陷入了影視幻境，并在潛意識中試圖通過對劇中偶像人物的模仿來重塑自我的生存環(huán)境。

另一方面，如果說以上所述的偶像符號的建構(gòu)和偶像奢侈生活的營造直接誘導受眾對影視幻境中消費奇觀的追逐的話，那么在偶像劇中通過影視符號傳遞的都市文化則以隱喻的方式完成了受眾對于精英消費社會符號幻境的價值認同。這里所謂的都市文化，脫胎于現(xiàn)代社會的城市文化，是在后現(xiàn)代主義的演變之下以思想和技術(shù)的發(fā)展變遷為支撐形成的“超城市”都市形態(tài)。由于這種都市文化與當代偶像劇中頻繁出現(xiàn)的隸屬于現(xiàn)代化大都市的相關(guān)畫面符號，如高樓大廈、娛樂會場、奇裝異服等相契合，因此通過偶像劇傳播的都市文化就可能形成一個都市的特定文化表征，亦即所謂的“都市名片”，進而對塑造都市形象、帶動都市化相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展發(fā)揮重要的作用。如《奮斗》中的取景地北京，劇中多次出現(xiàn)的西單、798工業(yè)區(qū)等等一系列都市符號共同描繪了北京作為一個國際化大都市的基本形貌，為都市文化的傳播提供了借鑒。美國的文化研究學者戴安娜?克蘭認為：“都市文化是階級文化……它們反映了消費這些文化的社會群體的價值、態(tài)度和資源。”〔4〕偶像劇在獲取受眾對都市文化價值認同的同時，也以這些都市文化的符號為介質(zhì)隱喻了消費都市文化的社會群體亦即精英群體的價值、態(tài)度和專屬資源，從而為受眾的都市消費創(chuàng)造了絕佳的條件。此外，“對都市文化的精英形式越來越影響的商業(yè)公司和都市開發(fā)者，并不是無功利性的……他們直接或間接試圖從他們與這些文化形式的聯(lián)系中牟利”〔4〕。

在傳播特性的把握上，偶像劇以電視為載體完成了符碼表征的消費建構(gòu)。迄今為止，廣告、電視和媒體通過對社會的徹底滲透而建構(gòu)的一種新的消費類型標志著一個新舊社會的徹底斷裂，這個建立在消費擬像之上的消費社會正是后現(xiàn)代主義思潮轉(zhuǎn)向的結(jié)果。偶像劇依靠獨特的藝術(shù)表征所建構(gòu)的幻象之城，在當今消費社會形態(tài)下生成的傳播價值延展了偶像劇都市時尚元素傳遞的時空——受眾不僅僅滿足于節(jié)目的觀賞，而且通過與人的話題交流、現(xiàn)實消費的參照，推動著影像幻境與現(xiàn)實幻境的融合，完成了偶像劇的傳播。受眾試圖通過現(xiàn)實中的物質(zhì)消費無限接近偶像劇營造的幻境之城，亦即鮑德里亞所說的“超真實”“擬像”世界的形成。《藍色生死戀》、《浪漫滿屋》等膾炙人口的韓國偶像劇通過夢幻化的神話敘事、軀體鏡語與類軀體鏡語的反復呈現(xiàn)，建構(gòu)了一個頗具崇拜價值的幻象之城。受眾在接受劇作的都市時尚化偶像傳播的同時，將這種審美價值認同傳遞給了消費社會的生產(chǎn)系統(tǒng)，無論是服裝、化妝品、家私甚至建筑風格都趨于影像化，而受眾更是試圖通過物質(zhì)消費參與超真實社會的擬造。

三、互文性與受眾身份的重塑

電視的多義性和互文性是生產(chǎn)型受眾誕生的基礎(chǔ)，而生產(chǎn)型受眾的誕生也為電視意義的多維解讀創(chuàng)造了條件。費斯克認為，“電視多義性”不僅是指“文本建構(gòu)時必然的龐雜性”，也指“不同社會地位的觀眾必然引發(fā)出的不同解釋”〔5〕。從“電視多義性”出發(fā)，文本在垂直和水平兩個向度上構(gòu)成了電視文本的互文性，受眾在以后現(xiàn)代為主的轉(zhuǎn)型風潮、媒介素養(yǎng)等因素的制約下呈現(xiàn)出審美意識的泛化，這兩個向度的相互作用建構(gòu)了偶像劇開放多元的詮釋空間。

文本的互文性是指文本在水平和垂直兩個層面上相關(guān)因素之間的互相呼應，這些因素互相闡發(fā)，互相補充，為文本的解讀提供了或共鳴或間離等多樣化的審美渠道。文本的水平面互文性是通過類型、角色和內(nèi)容等因素協(xié)作實現(xiàn)的，相同題材的不同文本之間、不同文本的相似角色之間表意符碼的先在性、模式化影響就是如此。例如日本最具人氣的漫畫《花樣男子》最早就由臺灣改編為經(jīng)典偶像劇《流星花園》，隨后日本韓國先后改編為《花樣少男少女》，地域差異下的三部偶像劇因內(nèi)容的細微差別建構(gòu)了偶像劇文本的水平互文性——劇中的四大男主角F4和女主角盡管名字各異，但由于情節(jié)相同而形成了趨同現(xiàn)象，為受眾的影視讀解提供了模式參考。

文本的垂直層面的互文性指的是原始文本與其他不同文本之間的相互指涉關(guān)系，費斯克區(qū)分了初級、次級、第三級三種電視文本。初級文本是電視機構(gòu)制作完成的原初文本；次級文本是為初級文本做宣傳或解讀的副文本，可分為宣傳策劃類（廣告)和媒介類（評論雜志、報紙、廣播等）兩種；三級文本指的是觀眾觀看以后發(fā)生的反應或彼此的交流，如口頭交談、觀眾來信、網(wǎng)絡(luò)評論等〔6〕。垂直層面的互文性在偶像劇中對于受眾的解讀起著關(guān)鍵作用，無論是次級文本還是三級文本，都深刻影響著受眾對于原初文本的解讀。如《一起來看流星雨》一劇，次級文本就以“芒果衛(wèi)視自制劇”、“新版《流星花園》”等種種噱頭為該劇的上映積累了充分的收視期待；而在《一起來看流星雨》上映之后，隨著三級文本的盛行，受眾對于該劇的解讀就自然形成了各自的團體，他們或褒或貶或中立，完成了多維視域下的解讀過程。

受眾審美意識的泛化拓展基于后現(xiàn)代主義思潮下受眾審美意識的轉(zhuǎn)型，有助于受眾的審美訴求在廣度和深度上交錯式地拓展。從利奧塔對后現(xiàn)代“就是針對元敘事的懷疑態(tài)度”的定義出發(fā)，后現(xiàn)代主義從根本上講就是一種對權(quán)威和傳統(tǒng)的顛覆，即反對單一，主張多元；解構(gòu)中心，解放形式〔7〕。

受眾審美訴求在廣度上的拓展主要表現(xiàn)為受眾審美意識的普遍覺醒以及審美活動的日常化、大眾化。“審美”作為一項高度藝術(shù)化、精英化的活動，曾經(jīng)與大眾保持一定的距離，在技術(shù)發(fā)展支撐下，電視普及所帶來的受眾電視劇審美意識的覺醒日益迫使大眾打破這種距離的間隔；而且偶像劇所特有的世俗化敘事方式也極大地拓寬了受眾的年齡范圍，使劇種脫離了精英階層的觀賞局限。因此，受眾在試圖吸收精英審美方式的同時，建立了后現(xiàn)代式的觀影態(tài)度，最終形成了偶像劇審美的日常性和大眾化。也就是說，多樣化的審美范式不再被精英審美排斥于認同范圍之外，任何人都可以對同一部電視劇做出個性化的審美品讀。對偶像劇的審美更加深刻地證明了這一點。同一部《藍色生死戀》，有人讀出了男女間至死不渝之愛，有人為女主角的堅強執(zhí)著所感動，有人則更深入地覺察到了韓劇隱晦的敘事策略所帶來的卓越傳播效果；《奮斗》中既有中國大學生為了生活而奮斗的拼搏精神，又有錯綜復雜的情感變遷，還有喧囂瑣碎市井生活的真實寫照。

而在深度上，受眾審美訴求的拓展主要表現(xiàn)為受眾在視覺審美上的開掘，從而誕生了“身體審美”之審美范式。偶像劇，顧名思義是將青春靚麗的青少年進行偶像塑造，而“偶像”這一符號在電視語言中是極其具象化的，唯有通過視覺語言的多角度詮釋，才能將“偶像”放置于兼具高度與前沿的位置。而這種視覺語言的“具象化”過程在偶像劇中突出表現(xiàn)為對主角身體的呈現(xiàn)，它強化了身體審美在偶像劇視覺審美范式中的特殊地位。“美學是作為有關(guān)身體的語言而誕生的。”〔8〕偶像劇的青少年受眾多處于尋求自我價值和社會認同的人生階段，而劇中青春偶像們的身體呈現(xiàn)恰好為他們提供了一種可供借鑒的、符合社會審美標準的鏡像模式，使他們習慣于根據(jù)這一鏡像來塑造自我的身體以及行為方式，以求更好地融入嬗變的社會場域。

參考文獻：

〔1〕費斯克.解讀電視〔M〕.鄭明椿,譯.臺北：臺灣遠流出版社，1993:63.

〔2〕余乃忠.“后現(xiàn)代”概念的譜系學懸疑〔J〕.學術(shù)月刊，2010，（8）:27.

〔3〕讓-弗朗索瓦里奧塔爾.后現(xiàn)代狀態(tài)：關(guān)于知識的報告〔M〕.車槿山,譯.上海：上海三聯(lián)書店出版社，1997:2.

〔4〕戴安娜?克蘭.文化生產(chǎn)：媒體與都市藝術(shù)〔M〕.趙國新，譯.南京：譯林出版社，2001：112，113.

〔5〕John Fiske.Television:Polysemy and Popularity〔J〕.Critical Studies in Mass Communication，1986，(3):391.

篇（6）

1、吃了春分飯，一天長一線。

2、春分種芍藥，到老不開花。

3、買種省了錢，減產(chǎn)后悔晚。

4、春分，日螟封分。

5、春分到清明，棉花干播種。

6、春分降雪春播寒。春分有雨是豐年。

7、春分不上炕，谷雨插不上。

8、春分無雨到清明。

9、春分有雨家家忙，先種瓜豆后插秧。

10、麥過春分晝夜忙。

11、兩頭去，中間留，玉米苗子黑油油。

12、春分時節(jié)，果樹嫁接。

13、春分大風夏至雨。

14、春分南風，先雨后旱。

15、春分降雪春播寒。

16、龍生龍，鳳生鳳，好種才有好收成。

17、春分豆苗粒粒伸。

18、春分無雨莫耕田，秋分無雨莫種園。

19、春分春分，晝夜平分。

20、春分不種麥，別怨收成壞。

21、春分麥，芒種糜，小滿種谷正合適。

22、有錢買種，無錢買苗。

23、要想出好苗，棉籽粒粒挑。

24、曬棉種，很重要：發(fā)芽勢，明顯好;發(fā)芽率，能提高。

25、春分西風多陰雨。

26、春分有雨家家忙。

27、春分不暖，秋分不涼。

28、春分有雨到清明，清明下雨無路行。

29、春分分芍藥，到老不開花。

30、好種出好苗，早發(fā)早結(jié)桃。

31、春分前冷，春分后暖;春分前暖，春分后冷。

32、種子買得賤，空地一大片。

33、要想莊稼長得兇，一家一個漚糞坑。

34、春分春分，百草返青。

35、春分有雨是豐年。

36、麥怕春旱，谷怕急雨。

37、紡好線，用好棉，好種壯苗長滿田。

38、春分刮大風，夏至雨。

39、春季雨豐不歉，冬有大雪多面。

40、春分天暖花漸開，馬驢牛羊要懷胎。

41、春分雨不歇，清明前后有好天。

42、春分前后，大麥豌豆。

43、春分不冷清明冷。

44、春分利大風，利到四月中。

45、春分天暖花漸開，牲畜配種莫懈怠。

46、春分前后怕春霜，一見春霜麥苗傷。

47、花開九不盡，果子沒人問。

48、半年的鍋頭當年的炕，熏透的煙囪發(fā)苗壯。

49、好種出好苗，好苗多結(jié)桃。

50、春分節(jié)到不能讓，地瓜母子快上炕。

51、種不正，苗不正，結(jié)個葫蘆歪歪腚。

52、春分無雨劃耕田。

53、春分麥起身，一刻值千金。

54、春分雨多，有利春播。

春分天氣諺語

1、春分陰雨天，春季雨不歇。

2、春分降雪春播寒。

3、春分前冷，春分后暖;春分前暖，春分后冷。

4、春分刮大風，夏至雨。

5、春分有雨到清明，清明下雨無路行。

6、春分麥起身，一刻值千金。

7、春分刮大風，刮到四月中。

8、春分前好布田，春分后好種豆。

9、春分不種麥，別怨收成壞。

10、要想莊稼長得兇，一家一個漚糞坑。

11、春分至，把樹接;園樹佬，沒空歇。

12、春分春分，百草返青。

13、要想出好苗，棉籽粒粒挑。

14、春分栽不妥，再栽難成活。

15、春分有雨是豐年。

16、新土填得多，大長胡蘿卜。

17、驚蟄蛾子春分蠶。

18、吃了春分飯，一天長一線。

19、曬棉種，很重要：發(fā)芽勢，明顯好;發(fā)芽率，能提高。

20、春分種芍藥，到老不開花。

21、春分麥，芒種糜，小滿種谷正合適。

22、春分南風，先雨后旱。

23、春分有雨家家忙，先種瓜豆后插秧。

24、春分分芍藥，到老花不開;秋分分芍藥，花兒開不敗。

25、若要莊稼壯，一年一換炕。

26、春分日，植樹木。

27、好種出好苗，好苗多結(jié)桃。

28、春分，日螟封分。

29、填平坑灣，先種黍穇。

30、春分到清明，棉花干播種。

31、春分前后，大麥豌豆。

32、春分不上炕，谷雨插不上。

33、有錢買種，無錢買苗。

34、春分早報西南風，臺風蟲害有一宗。

35、春分降雪春播寒。春分有雨是豐年。

36、花開九不盡，果子沒人問。

37、春分時節(jié)，果樹嫁接。

38、追肥澆水跟松耪，三舉配套麥苗壯。

39、春分秋分，晝夜平分。

40、花開九不盡，果價要跑人。

41、春分前后怕春霜，一見春霜麥苗傷。

42、麥到春分晝夜長。

43、好種出好苗，早發(fā)早結(jié)桃。

44、紡好線，用好棉，好種壯苗長滿田。

45、春分不暖，秋分不涼。

46、春分早、谷雨遲，清明種薯正當時。

節(jié)氣諺語相關(guān)文章：

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2.表達春天節(jié)氣的諺語有哪些

3.有關(guān)春分的民間諺語

篇（7）

Overexpression and purification of catalase-peroxidase katG from mycobacterium tuberculosis

【Abstract】Objective　To express and purify the catala se-peroxidase katG gene from mycobacterium tuberculosis. Methods　 Plasmid pET24b containing katG was transferred into com petent Escherichia coli and katG gene was overexpressed by the challenge of isopropylthio-β-D-glactoside(IPTG). The expression of katG protein was on e-step purified by Xpress systemTM. Furthermore， the catalase activity of katG protein was preliminarily detec ted. Results　The recombinant escherichia coli produced katG p rotein in large quantities， accounting for 17.7% of total cell protein. The mole cular mass of katG protein was estimated to be 80 000 by sodium dodecyl sulfate -polyacrylamide gradient gel electrophresis (SDS-PAGE). It was found that imidazole at the concentration of 350 mmol/L could elute the katG protein most efficiently and yield the final preparation at greater than 90% purity. Th e katG protein was preliminarily detected to have the activity of catalase. Conclusions　The stable katG overexpressing recombinant Escherichi a coli can be constructed by the plasmid pET24b containing katG gene. The reco mbinant strain can produce katG protein with catalase activity and the product o f which can be purified into higher activity.

【Key words】Mycobacterium tuberculosis; katG ; Gene expression; Protein purification

異煙肼(INH)是一種最經(jīng)濟有效的抗癆藥，幾乎所有的抗癆方案中均包括IN H。結(jié)核分支桿菌編碼的katG基因的突變可致結(jié)核分支桿菌對INH 產(chǎn)生耐藥性［1］。自1992年以來，對于katG基因變異或缺失造成分支桿菌對異煙肼 耐藥的基因水平研究已較為深入［1，2］，有必要在蛋白水平對耐藥機制進行進一步 研究。本研究將含有katG基因的pET24b-katG表達載體轉(zhuǎn)化埃希大腸桿菌BL21(DE3)菌株 ，獲得穩(wěn)定的高表達菌株后進一步對表達產(chǎn)物進行了純化，并對純化產(chǎn)物進行了酶活性的初 步檢測。

材料與方法

一、材料

(一) 質(zhì)粒與菌株　表達質(zhì)粒pET24b-katG與埃希大腸桿菌BL21(DE3)由復旦大學遺傳學研究 所惠贈。

(二) 試劑　XpressTM蛋白純化系統(tǒng)為美國Invitrogen公司產(chǎn)品；異丙基-β-D硫代 半乳糖苷(IPTG)為華美生物工程公司產(chǎn)品；其他主要生化試劑為美國Sigma公司產(chǎn)品或國內(nèi)A R級產(chǎn)品。

二、方法

(一) 表達載體的轉(zhuǎn)化與基因產(chǎn)物的表達　將表達質(zhì)粒pET24b-katG轉(zhuǎn)化用氯化鈣處理法得 到的感受態(tài)大腸桿菌BL21(DE3)菌株，將菌株涂于含卡那霉素的LB平板上，30°C過夜培養(yǎng)。 挑取抗卡那霉素的菌株接種于20 ml的LB培養(yǎng)基(加入20%的葡萄糖0.2 ml，濃度50 mg/ml的 卡那霉素40 μl，濃度20 mg/ml的氯霉素34 μl)中，37°C，160 r/min振搖過夜。取3 ml過 夜培養(yǎng)物種入100 ml的LB培養(yǎng)基(含20%的葡萄糖1 ml，濃度10 mg/ml的卡那霉素400 μ l， 濃度20 mg/ml的氯霉素170 μl)中，37°C以160 r/min振搖，每20 min測定1次A60 0值，直至A600值到達0.4～0.5(勿超過0.5)。隨后每100 ml LB培養(yǎng)基中 加入1 mol/L IPTG 400 μl，分別在加入IPTG后的第2、3、4、5、6 h收集菌液。將菌液在4 °C下，5 000 g，離心5 min，棄上清。將沉淀物以10 ml緩沖液(50 mmol/L Tris.Cl， pH 8 .0， 2 mmol/L EDTA， 0.1% Triton X-100)重新懸浮，加入溶菌酶(100 μg/ml)。在冰浴中以中等強度超 聲破菌，每次10 s，共3次，破菌后，4°C， 離心5 min，收集上清液備用。

(二) 表達產(chǎn)物的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測　參照文獻［3］ 進行。收集IPTG誘導后的菌液10 μl，與 加樣液10 μl混合，100°C水浴，3 min后點樣，25 mA恒流通電進行SDS-PAGE。電泳后以 考馬斯亮藍染色15 min，然后以脫色液脫色觀察結(jié)果。

(三) 表達產(chǎn)物的純化　采用Xpress TM蛋白純化系統(tǒng)進行純化。用無菌雙蒸水懸 浮樹 脂純化柱3次。加入7 ml結(jié)合液(20 mmol/L磷酸鈉，500 mmol/L氯化鈉，pH 7.8)，以及經(jīng)IP TG不同時間誘導后產(chǎn)量最高的破菌液上清5 ml，重新懸浮純化柱。反復輕搖混合2 min。靜 置10 min，吸棄上清，再加入破菌液上清5 ml重復以上步驟。以4 ml結(jié)合液重新懸浮純 化柱 ，溫和搖動混合2 min，靜置沉淀，吸棄上清，共3次。再以沖洗緩沖液(20 mmol/L磷酸鈉， 500 mmol/L氯化鈉，pH 6.0)洗4次，分別以不同濃度的咪唑洗脫液(50、200、350、500 mmo l/L)各5 ml加入柱中，收集不同洗脫濃度的洗脫液。將洗脫液進行SDS-PAGE。將純化后的 蛋白以85%的硫酸胺沉淀，離心后將沉淀物以無菌雙蒸水溶解，4°C透析過夜。透析產(chǎn)物加 入甘油(40%)后貯藏于-80°C的環(huán)境下。

(四) 過氧化氫酶活性測定　對破菌液上清進行過氧化氫酶活性的初步測定。用磷酸鹽(K2 HPO4+KH2PO4，0.1 mol/L)與NaCl(2 mol/L)的緩沖液配制10%的Tween 80溶液，取 5 ml 與30%的雙氧水5 ml混合。分對照管與katG管，在katG管內(nèi)加入不同容積的含pET-katG表達 質(zhì)粒的菌株破菌上清(20、40、80、160 μl)，對照管 則加入含pET空載體的菌株破菌上清，10 min后觀察氣泡產(chǎn)生情況。如產(chǎn)生大量氣泡則提示 酶活性較佳。

結(jié)

果

一、重組katG蛋白的誘導表達以及產(chǎn)物的鑒定分析

將含有katG基因的pET24b-katG表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，在IPTG誘導下表達，分別對不同誘 導時間的表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE以及考馬斯亮藍染色，可在相對分子質(zhì)量80 000處見一誘 導表達帶 (圖1)。比較不同誘導時間的表達產(chǎn)量可以發(fā)現(xiàn)，經(jīng)誘導2 h后的表達產(chǎn)量已達到峰值。在其 后蛋白純化中即可選取該誘導時間的產(chǎn)物。對此誘導表達帶進行黑度密度自動掃描分析，此 處表達蛋白量約占總菌體蛋白量的17.7%。

二、重組katG基因表達產(chǎn)物的純化結(jié)果

采用Xpress TM蛋白純化系統(tǒng)進行純化發(fā)現(xiàn)，分別以不同濃度的咪唑洗脫液(50、 200、350、500 mmol/L)洗脫純化柱后，所收集的洗脫液再次進行SDS-PAGE分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn) ，以350 mmol/L咪唑洗脫后純化的效率最高，通過SDS-PAGE黑度密度自動掃描分析可以發(fā) 現(xiàn)純化率可達90%以上。

三、對katG基因表達產(chǎn)物的過氧化氫酶活性測定結(jié)果

在過氧化氫反應系統(tǒng)中加入不同容積的破菌上清(20、40、80、160、320 μl)，比較氣泡產(chǎn) 生情況，發(fā)現(xiàn)加入含pET-katG表達質(zhì)粒的菌株破菌上清的各管均有氣泡產(chǎn)生，且均較對照 管為明顯，而以加入量為160 μl與320 μl的反應管產(chǎn)生氣泡最為顯著。提示重組katG表達 產(chǎn)物具有過氧化氫酶活性。

討

論

結(jié)核分支桿菌的katG在INH的抗結(jié)核作用機制中起著關(guān)鍵作用。研究表明INH實際上是一個 藥物前體，需經(jīng)結(jié)核分支桿菌過氧化氫酶-過氧化物酶活化后 才發(fā)揮抗結(jié)核作用，而katG則由katG基因所編碼［4］。有研究 通過質(zhì)粒將katG基因轉(zhuǎn)移到INH耐藥菌株胞內(nèi)，可令其對INH重新恢復敏感性。而對結(jié)核分支 桿菌的臨床耐異煙肼菌株進行katG基因分析亦發(fā)現(xiàn)該基因的缺失或突變是引起耐藥的主要原 因［5］。然而對于katG如何活化INH以及katG發(fā)生變異后導致耐藥的 確切機制仍然 不清，特別是近年來對于不同突變位點變異對藥物敏感性的影響程度頗有爭議［6］ ，因此在蛋白水平研究katG的作用環(huán)節(jié)與耐藥機制，以及比較不同位點 基因突變對酶結(jié)構(gòu)與活性的影響等方面進行研究可深入了解INH耐藥的發(fā)生機制，進而可 能在蛋白水平找到消除耐藥的途徑。由于結(jié)核分支桿菌生長較緩，而且具有較強的傳染性， 長期以來在提取結(jié)核分支桿菌蛋白進行研究的進展較緩。本研究通過基因重組的katG表達載 體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌后產(chǎn)生高表達的katG蛋白，相對分子質(zhì)量約為80 000，表達量可占總菌體 蛋白的17.7%。表明該基因重組的菌株為katG的高表達菌株，對表達產(chǎn)物進行初步過氧化氫 酶活性研究驗證了其酶活性。進一步對表達產(chǎn)物進行純化后可提取到純度超過90%的katG蛋 白。本研究為進一步研究katG蛋白、katG對異煙肼的活化機制以及為檢測katG變異耐藥菌株 奠定基礎(chǔ)，并且對深入闡明INH的耐藥產(chǎn)生機制與尋求消除耐藥的方法有較大的意義。

參考文獻

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3，Sambrook J， Fritsch EF， Maniatis T，著. 分子克隆實驗指南.金冬雁，黎孟楓，譯. 第2版. 北京：科學出版社，1992.

篇（8）

RIZ1是功能性篩選能與視網(wǎng)膜母細胞瘤（RB）腫瘤抑制因子相結(jié)合的蛋白質(zhì)時分離出來的基因。已發(fā)現(xiàn)由于不同啟動子的作用，RIZ1可以表達兩種蛋白產(chǎn)物，即氨基端含有PR結(jié)構(gòu)域的全長產(chǎn)物RIZ1（1719個氨基酸），以及除缺少RIZ1氨基末端200個氨基酸（包含PR結(jié)構(gòu)域）外其余序列與RIZ1完全相同的RIZ2［1］。研究表明，RIZ1而非RIZ2具有腫瘤抑制特性。一般來說，RIZ1定位于人染色體1p36，為多種不同類型人癌組織所缺失［2］。許多人類腫瘤，如肝癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)母細胞瘤、肺癌、黑素瘤、骨肉瘤的組織中出現(xiàn)RIZ1而非RIZ2表達沉默［35］。我們初步研究也發(fā)現(xiàn)，人乳腺癌組織中存在RIZ1 mRNA表達的改變［6］。人癌組織和細胞株中RIZ1錯義失活性突變均出現(xiàn)在PR結(jié)構(gòu)域內(nèi)或其附近［7］。在乳腺癌細胞系、肝癌細胞系中由腺病毒介導的RIZ1表達可以造成細胞G2M期阻滯和（或）細胞凋亡［35］。更重要的是基因敲除鼠若無RIZ1表達而僅有RIZ2表達，則易發(fā)生胃癌和B細胞淋巴瘤［7］。通過以上研究可以確定PR結(jié)構(gòu)域與腫瘤的發(fā)生有直接聯(lián)系，因此，目前認為RIZ1抑制腫瘤的作用與其PR結(jié)構(gòu)域有關(guān)。為了更好地研究RIZ1 PR結(jié)構(gòu)域的功能與結(jié)構(gòu)，我們采用基因工程技術(shù)合成并提純了RIZ1氨基末端含PR結(jié)構(gòu)域的200個氨基酸的融合蛋白，并初步探討了其體外功能，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

11 材料pRIZ1 RH質(zhì)粒由本研究組保存；原核表達載體質(zhì)粒pGEX6P3購自Amersham Biosciences公司，是一種融合蛋白表達載體，含一個可編碼谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)的讀碼框架，其下游有多克隆位點，插入符合相應讀碼框架的外源基因片段，在IPTG的誘導下可表達出與GST相融合的蛋白質(zhì)；大腸桿菌CM1061菌株（購自New England Biolabs）、大腸桿菌BL21（DE3）表達菌株（購自EMD Bioscienses）由本課題研究組保存；Pfu DNA聚合酶等PCR試劑購自Stratagene公司；PCR產(chǎn)物純化試劑盒(QIAquick PCR Purification Kit)、大量質(zhì)粒提取試劑盒(QIAGEN Plasmid Maxi Kit)為QIAGEN公司產(chǎn)品；限制性內(nèi)切酶EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ購自Fermentas公司；T4 DNA連接酶購自New England BioLabs公司； Glutathione Agarose吸附柱購自Sigma公司；人組蛋白 H3購自upstate公司；AdenosylLMethionine，S［methyl3H］ 購自PerkinElmer公司；BioRad蛋白測定試劑盒購自BIORAD公司。

12 PCR引物的設(shè)計與合成目的基因為含PR結(jié)構(gòu)區(qū)的PR200基因片段，位于RIZ1全基因序列的第1~600個核苷酸(nt1600)。通過GenBank檢索RIZ1的cDNA序列，采用DNA Star軟件設(shè)計PCR引物，上游引物（GSTPR200P1）序列為：5′ACCGAATTCCATGGAAGTGAGGCTTTTCCCTTC3′，含EcoRⅠ酶切位點及啟始密碼子；下游引物（GSTPR200P2）序列為：5′CTCCTCGAGTCATTATGCAGAG GTGAAATCTGGCT3′，含終止密碼子及XhoⅠ酶切位點。引物由Invitrogen公司合成。

13 目的基因的PCR擴增以 pRIZ1 RH質(zhì)粒為模板，以GSTPR200 P1、GSTPR200 P2為引物，采用Pfu DNA聚合酶PCR擴增目的基因。陰性對照以等量去離子水代替模板。其反應條件為：95℃ 13min 熱啟動；95℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 60 s，30個循環(huán)；最后72℃延伸10min。取PCR產(chǎn)物5μl，DNA Marker 1μl，經(jīng)2 % 瓊脂糖凝膠電泳后，在紫外燈下觀察結(jié)果。產(chǎn)物純化后經(jīng)ABI PRISMTM 310 型基因分析儀（PERKIN ELMER） 測序確認。

14 重組載體的構(gòu)建

141 PCR反應產(chǎn)物的純化 將以上PCR產(chǎn)物點樣于2 %的瓊脂糖凝膠進行電泳，使用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化回收，用20μl去離子水溶解，取1μl在2 %瓊脂糖凝膠電泳上檢查，純化成功后－20℃貯存。

142 載體pGEX6P3的制備 將原核表達載體pGEX6P3轉(zhuǎn)入大腸桿菌CM1061菌株。挑取單個菌落培養(yǎng)，用質(zhì)粒提取試劑盒大量提取質(zhì)粒DNA，溶解于50μl的去離子水中。－20℃貯存。

143 PR200－pGEX6P3原核重組表達載體的構(gòu)建 將純化后的PCR 產(chǎn)物和pGEX6P3表達載體同時分別用核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ與XhoⅠ雙酶切， 并分別用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化，氯仿抽提法回收。在T4 DNA連接酶作用下，連接含PR 基因片段與表達載體獲得了PR200－pGEX6P3重組質(zhì)粒（5 498 bp）。

15 表達重組蛋白陽性克隆的檢測與鑒定用PR200－pGEX6P3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）表達菌株， 涂布含100mg?L-1 AMP 的LB瓊脂平板，37℃恒溫培養(yǎng)過夜，平板上長出較好菌落。挑取陽性菌落接種在10ml含青霉素抗性的LB 試管中，37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜。次日按1∶60的比例接種過夜，培養(yǎng)物于15ml含青霉素抗性的LB 試管中，于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至OD600 nm為05～08，均分該培養(yǎng)物為兩部分，一部分加入異丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)至終濃度為1mmol?L-1以誘導GSTPR200表達，另一部分不加IPTG作對照，繼續(xù)培養(yǎng)5 h，每隔1h兩部分各取1ml 培養(yǎng)物離心后留沉淀細胞置-70℃冷凍過夜。采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS PAGE)法，檢測與鑒定能夠表達與GST融合的含PR結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白質(zhì)(GSTPR200融合蛋白)的陽性菌落。

16 GSTPR200融合蛋白的提純與質(zhì)譜分析挑取GSTPR200融合蛋白表達陽性菌落接種在10ml含青霉素抗性的LB 試管中，37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜，次日按1∶60的比例接種于400ml含青霉素抗性的LB 培養(yǎng)瓶中，于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至OD600 nm 為05～08，加入IPTG至終濃度為1mmol?L-1以誘導GSTPR200表達，繼續(xù)培養(yǎng)40～50 h。離心收取細胞，置-70℃冷凍過夜。次日用5ml PBST重新懸浮細胞，于4℃溫度下超聲破碎細胞，利用Glutathione Agarose吸附柱提純GSTPR200融合蛋白。通過WatersMicromass LCT質(zhì)譜系統(tǒng)（Waters公司）分析該蛋白質(zhì)的分子量。

17 純化GSTPR200融合蛋白的組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶(HMT)活性測定

采用BioRad蛋白測定試劑盒檢測純化的GSTPR200融合蛋白濃度后，按組蛋白HMT測定法分析該蛋白質(zhì)的活性［8］。反應體系如下：總?cè)莘e為40μl，含20mmol?L-1 TrisHCl （pH 80），02 mol?L-1 NaCl，04 mmol?L-1 EDTA，1 mmol?L-1 DTT，4 μg 純化的GSTPR200融合蛋白或GST蛋白（陰性對照），5μg組蛋白H3，3μl （165μCi）AdenosylLMethionine，S［methyl3H］。 各反應混合物于37℃孵育10～20 h 后，分別取5μl（各設(shè)3個測定樣品，共取15μl）反應物在P81上點樣、沖洗、晾干，采用LS 6000IC型液閃儀（BECKMAN公司）測定每分鐘脈沖數(shù)（CPM）以說明蛋白質(zhì)HMT活性度。

2 結(jié)果

21 PCR擴增的目的基因PCR擴增產(chǎn)物長度為625 bp，其中目的基因為600 bp，引入擴增產(chǎn)物兩端的限制性內(nèi)切酶識別位點序列、啟始密碼子與終止密碼子識別位點序列及保護堿基長25 bp。同DNA相對分子質(zhì)量參照物相比，PCR擴增產(chǎn)物的大小與預測的結(jié)果一致（圖1）。

圖1 PCR 擴增PR200的結(jié)果(2 %瓊脂糖電泳)（略）

Fig 1 Amplification of PR200 with PCR (2 % agarose gel)

1 DNA ladder；2 Negative control；3 PCR product

22 檢出的表達重組蛋白陽性克隆經(jīng)SDSPAGE蛋白電泳，考馬斯亮藍R250染色觀察，包含重組質(zhì)粒的誘導菌在相對分子質(zhì)量47 000位置出現(xiàn)一蛋白條帶，而未誘導的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌在相應位置的蛋白條帶要弱得多；含質(zhì)粒pGEX6P3的誘導菌在相對分子質(zhì)量27 000位置出現(xiàn)一條帶。目的基因表達的多肽相對分子質(zhì)量為19700，與融合蛋白共同表達相對分子質(zhì)量約為47 000，與理論估計值相一致。見圖2。

圖2 IPTG誘導轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）菌株表達的SDSPAGE 結(jié)果（略）

Fig 2 SDS PAGE showing the IPTGinduced expression of the transformed Ecoli BL21（DE3）cells

1標準蛋白質(zhì)；2未誘導的轉(zhuǎn)化pGEX6P3的BL21細胞；3誘導后的轉(zhuǎn)化pGEX6P3的BL21細胞；4、6、8分別為未誘導的三個菌落的轉(zhuǎn)化PR200－pGEX6P3 BL21細胞；5、7、9分別為誘導后的三個菌落的轉(zhuǎn)化PR200－pGEX6P3 BL21細胞。 每泳道加樣量約15μg， 12 % 膠。

1 Standard proteins; 2 Uninduced BL21 cells of pGEX6P3 transformed clone; 3 Induced BL21 cells of pGEX6P3 transformed clone; 4，6，8 Uninduced PR200pGEX6P3 transformed BL21 cells of three clones，respectively; 5，7，9 Induced PR200pGEX6P3 transformed BL21 cells of three clones， respectively 15μg per lane， 12 % gel

23 GSTPR200融合蛋白的純化與質(zhì)譜分析通過Glutathione Agarose吸附柱提純的GSTPR200融合蛋白經(jīng)SDSPAGE蛋白電泳，考馬斯亮藍R250染色，在相對分子質(zhì)量47 000位置呈現(xiàn)單一的蛋白條帶（圖3）。質(zhì)譜分析可見46980 處出現(xiàn)單一峰，進一步明確了該純化融合蛋白質(zhì)與預期的分子質(zhì)量一致（圖4）。

圖3 GSTPR200融合蛋白純化的SDSPAGE 結(jié)果（略）

Fig 3 SDSPAGE showing the purification of GSTPR200

1：標準蛋白質(zhì)；2：誘導后細胞破碎液；3：通過柱子后的細胞破碎液；4：洗柱液； 5，6：蛋白洗脫液。 每泳道加樣量約15μg， 12 % 膠。

1 Standard proteins；2 Induced lysate；3 Through flow；4 Washing flow；5，6 Elutions 15μg per lane， 12 % gel

圖4 純化GSTPR200融合蛋白質(zhì)譜分析結(jié)果（略）

Fig4 Mass spectrometry analysis of the purified GSTPR200

24 GSTPR200融合蛋白對組蛋白甲基化作用采用HMT測定法可見，GSTPR200融合蛋白組CPM（孵育1、2 h后的3個樣本CPM均值分別為817±58、1192±83）明顯高于對照組（GST蛋白質(zhì)組，分別為135±12、184±21）， 兩者差異具有高度顯著性（P

3 討論

PR結(jié)構(gòu)域是腫瘤抑制因子RIZ1的功能區(qū)域，本研究為了原核表達與純化含該結(jié)構(gòu)域的融合蛋白質(zhì)（GSTPR200融合蛋白），選用了pGEX6P3載體。該載體具有GST 融合特征，可利用此標簽進行純化。采用大腸桿菌BL21（DE3）表達菌的優(yōu)點在于該菌T7 RNA聚合酶基因可受IPTG誘導表達，而且該菌沒有膜結(jié)合性蛋白分解酶活性，可抑制表達的融合蛋白質(zhì)分解。本研究通過將重組載體PR200－pGEX6P3轉(zhuǎn)入BL21（DE3）表達菌，成功地構(gòu)建了GSTPR200融合蛋白的原核表達系統(tǒng)，并提純了該融合蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)PR結(jié)域能夠使組蛋白H3中的第9賴氨酸甲基化，而人癌組織因PR結(jié)構(gòu)域基因突變造成RIZ1甲基轉(zhuǎn)移酶活性降低［89］。本研究為了了解所獲得的GSTPR200融合蛋白是否具有甲基化活性，采用HMT測定法對提純的融合蛋白質(zhì)進行了檢測。由于組蛋白H3與甲基在HMT的作用下可形成甲基化組蛋白H3，根據(jù)這一原理以3H標記甲基（［3H］methyl），將其與組蛋白H3及受檢測的蛋白一起反應，通過測定CPM可反映形成的甲基化組蛋白H3的量，以說明該蛋白的HMT活性。本研究中純化的GSTPR200融合蛋白組CPM比對照組（GST蛋白質(zhì)組）明顯增高，表明得到的融合蛋白質(zhì)中PR部分具有HMT活性。本研究純化蛋白的大量獲取為進一步研究RIZ1 PR區(qū)域的結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ)。

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篇（9）

[關(guān)鍵詞]鈦：微弧氧化：陶瓷氧化膜

[中圖分類號]R783　[文獻標識碼]A　[文章編號]1008―6455(2007)01－0107―03

純鈦及鈦合金具有良好的生物相容性和機械加工性能，為目前臨床應用最廣泛的口腔種植材料，但鈦基種植體存在生物活性差，與骨結(jié)合強度低，愈合時間長及耐磨、耐腐蝕性差，在生理環(huán)境下易造成金屬離子釋放等問題，因此為了獲得更優(yōu)的純鈦種植體，需通過對鈦進行表面改性來解決。

在眾多的表面改性方法中，微弧氧化是一項在金屬表面原位生長氧化物陶瓷層的新技術(shù)，它可改變純鈦種植體表面氧化層的厚度、化學組成、晶相結(jié)構(gòu)、表面微形貌、粗糙度等多種特性，將此法用于純鈦表面改性，可形成粗糙多孔、耐腐蝕、含有不同比例元素的活性氧化層，這種結(jié)構(gòu)有利于提高種植體表面的生物活性，改善其耐腐蝕性，而最新的研究發(fā)現(xiàn)向電解液中加入Ca、P、Si、Mg等成分后所制成的TiO2涂層，可促進種植體與骨之間的早期結(jié)合，提高種植體成功率，其中尤以Ca、Mg的效果最為顯著。因此，本實驗擬采用分別含Ca、Mg等元素的不同配方的電解液，利用微弧氧化工藝，對純鈦表面進行生物改性。

1　材料與方法

1．1材料：TA2純鈦(西北有色金屬研究院)：乙酸鈣、乙酸鎂(國產(chǎn)分析純)：β－甘油磷酸鈉(Sigma公司分析純，美國)。

1．2方法：①試件制備及預處理：／A2純鈦板經(jīng)線切割加工成(10×10×3)mm3試件，以280＃、500＃、800＃水砂紙逐級打磨，丙酮、無水乙醇、蒸餾水超聲清洗后干燥備用：②試件分組：MAO-1組和MAO-2組：③電解液配制：MAO―1組按一定的鈣、磷離子濃度將乙酸鈣、β－GP溶于去離子水中配制成電解液1：MAO-2組按一定的Mg離子濃度將乙酸鎂溶于去離子水中配制成電解液2；④試件微弧氧化處理：以鈦試件為陽極，不銹鋼電解槽為陰極，分別在電解液1和電解液2中采用脈沖一直流電源對鈦試件進行微弧氧化處理，并控制電解液溫度在40℃以下，MAO－1組電壓設(shè)定為450V，頻率900Hz，占空比5％，處理時間5mim MAO-2組電壓設(shè)定為450V，頻率600Hz，占空比10％，處理時間5min；⑤試件分析：以掃描電鏡(SEM)觀察膜層的表面形貌，X射線衍射(XRD)和X射線能譜(EDX)分析膜層的成分和元素分布。

2　結(jié)果

2．1膜層的表面形貌特點：微弧氧化處理中試件表面可見無數(shù)個微小、明亮、游動的電弧光，處理后的兩組純鈦試件均表面平整，形成了一層均勻的呈灰白色的陶瓷膜層，經(jīng)渦流測厚儀測得MAO-1組膜層厚度約為6μm，MAO-2組膜層厚度約為5μm。表面的掃描電鏡示兩組表面均粗糙多孔，呈現(xiàn)交織網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)(如圖1～2)。

2．2能譜分析：能譜分析見MAO―1組陶瓷膜由Ti，Ca，P，0 4種元素組成(如圖3)；MAO-2組陶瓷膜由Ti、Mg、0 3種元素組成(如圖4)。

2．3 X射線衍射分析：X射線衍射分析表明MAO-1組氧化膜由金紅石型的TiO2、銳鈦礦型TiO2和鈣鈦礦型CaTiO3組成(如圖5)；MAO-2組氧化膜由金紅石型的TiO2、銳鈦礦型TiO2和鎂鈦礦型MgTiO3組成(如圖6)。

3　討論

目前，提高種植體與骨組織結(jié)合的主要方法包括：使種植體表面形貌粗糙，使其具備生物活性，種植體與骨組織間實現(xiàn)化學性結(jié)合，種植體在生理環(huán)境下耐腐蝕性等。為了提高這些特性，目前純鈦種植體的表面改性方法很多，按工藝原理主要分：①物理法(粗糙化法、等離子噴涂法、離子注入法等)；②化學法(處理法、溶膠凝膠法、H2O2，處理法等)：⑧電化學法(電化學沉積法、電泳沉積法、微弧氧化法等)。

其中物理法主要是改變純鈦種植體表面形貌和粗糙度，有利于成骨細胞的附著和骨組織生長，增加與骨組織間的機械性結(jié)合，但這種方法不能改變純鈦種植體表面的化學特性，不具備生物活性，種植體與骨組織間結(jié)合力不強；化學法則主要是在種植體表面附加生物玻璃、羥基磷灰石等生物活性涂層，利用這些活性涂層來促進種植體與骨組織的早期結(jié)合，但這些涂層大多與種植體間結(jié)合力不強，在機體生理環(huán)境下耐腐蝕能力差，涂層易分層、降解甚至剝落，長期效果不佳。因而這些方法還存在一些缺點，不能完全滿足臨床上的需求。

微弧氧化技術(shù)，可很好的解決以上的問題，它是近年來在陽極氧化基礎(chǔ)上建立起來的一項在有色金屬表面原位生長陶瓷膜的新技術(shù)，它在工作中使用較高電壓，期間發(fā)生了熱化學、等離子體化學和電化學等多種反應。微弧氧化時微弧區(qū)瞬間高燒結(jié)作用可直接把鈦基體金屬氧化燒結(jié)成TiO2陶瓷膜，該層膜粗糙多孔，并且為金屬表面原位生長，厚度均勻，與基體間結(jié)合牢固，且內(nèi)層極其致密，極大提高了鈦金屬的耐腐蝕耐磨能力。

近年來研究表明鈦種植體表面粗糙度的增加可以增強磷酸鈣鹽的沉積，提高成骨細胞造蛋白質(zhì)和攝取鈣離子的能力，多孔粗糙的鈦表面有利于人成骨細胞的附著、增殖分化和功能表達，增強種植體與骨組織間結(jié)合力。本實驗掃描電鏡結(jié)果可見不同電解液處理的兩組試件表面均粗糙多孔，呈現(xiàn)交織網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為將來骨細胞附著和骨組織生長提供了較理想的材料表面形貌。

微弧氧化過程中電解質(zhì)離子由于參與了微弧區(qū)的物理化學反應，因而也通過高溫擴散到了氧化膜中。因此，通過調(diào)整電解液成分，可以方便地改變氧化層的化學組成，使氧化層內(nèi)含有提高骨組織結(jié)合所需的活性元素，從而實現(xiàn)種植體與骨組織間的化學性結(jié)合。最新的研究表明當TiO2涂層中含有一

定量的Ca、P、Mg成分，鈦種植體與骨組織間結(jié)合會顯著增加。本實驗通過電解液成分的改變和電參數(shù)的控制，使溶液中的Ca、P、Mg元素分別進入氧化層中。能譜證實MAO-1組氧化膜由Ti、Ca、P、0 4種元素組成；MAO-2組氧化膜由Ti、Mg、0 3種元素組成，其中Ti為基體成分，0為氧化過程中產(chǎn)生，而Ca、P、Mg的大量存在則充分說明了微弧氧化中伴隨著沉積過程，電解液中的離子進入并參與了氧化膜的形成，從而在鈦表面形成了含有不同比例元素的活性氧化層，有利于將來種植體與骨組織間結(jié)合。

XRD分析表明MAO-1組和MAO一2組氧化膜均由金紅石型的TiO2、銳鈦礦型TiO2組成，不同之處在于MAO-1組還含有鈣鈦礦型CaTiO3，而MAO-2組氧化膜還含有鎂鈦礦型MgTiO3。金紅石型和銳鈦礦型TiO2表明氧化膜為致密的陶瓷層結(jié)構(gòu)，并且有研究顯示TiO2的生物相容性高于純鈦，尤其是銳鈦礦型TiO2已被證實有誘導骨樣磷灰石形成功能，具有一定生物活性。鈣鈦礦型CaTiO3和鎂鈦礦型MgTiO3衍射峰的存在則說明在微弧氧化過程中由于復雜的化學反應使電解液中的Ca和Mg成分進入到氧化層中，并形成了一定的晶相結(jié)構(gòu)，且含量較高。韓國和瑞典的學者報道了含CaTiO3、MgTiO2的TiO2涂層，在模擬體液中可誘導出骨樣磷灰石。因此，可說明MAO―1組和MAO-2組氧化膜均具有一定的生物活性。

4　結(jié)論

篇（10）

中圖分類號：Q786 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）05-1189-02

目前，對于抗菌肽分子在先天免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用的機理還不是十分清楚，根據(jù)目前的研究結(jié)果來看，抗菌肽分子在發(fā)揮抑菌功能的過程中主要存在兩種模式，一種是直接與細菌作用將其瓦解，另一種是發(fā)揮蛋白酶活性抑制劑作用來將細菌除掉[1]。本研究以凡納對蝦（Litopenaeus vannamei）重組Lv-SWD蛋白作為研究對象，通過蛋白質(zhì)表達純化以及多克隆抗體的制備，利用細菌結(jié)合試驗來研究Lv-SWD的細菌結(jié)合作用，進一步豐富無脊椎動物先天免疫系統(tǒng)關(guān)于抗菌肽的基本理論。

1 材料與方法

1.1 材料

表達菌株是含有pET-28a-Lv-SWD重組子的大腸桿菌表達菌株。細菌結(jié)合試驗的目標菌株分別是2種革蘭氏陽性細菌（金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus、巨大芽孢桿菌Bacillus subtilis）和2種革蘭氏陰性細菌（綠膿桿菌Pseudomonas aeruginosa和弧菌Vibrio）。制備多克隆抗體需要的家兔為包頭市花苑小動物市場購買的普通長耳白兔。

1.2 方法

1.2.1 目的蛋白的表達純化 對構(gòu)建的重組Lv-SWD蛋白的重組表達菌株進行IPTG誘導表達，離心收集菌體進行超聲波破碎，并且通過蛋白質(zhì)電泳試驗分析破碎后的上清液與包涵體沉淀中目的蛋白質(zhì)的存在情況。對于存在于破碎后上清液中的目的蛋白質(zhì)，可以直接利用His-tag鎳柱進行親和純化；對于存在于包涵體中的目的蛋白質(zhì)，要進行變性后的透析處理，才能進行親和純化[2]。

1.2.2 多克隆抗體的制備與檢測 將親和純化后的目的重組蛋白質(zhì)進行SDS-PAGE試驗，檢測蛋白質(zhì)的純度，利用Bradford法檢測目的重組蛋白的濃度；之后將目的蛋白質(zhì)作為抗原免疫家兔，進行多克隆抗體的制備；家兔免疫共需要4～5次，每次注射間隔7～10 d，并且按照皮下多點注射的原則每次至少注射200 ？滋g重組蛋白。首次免疫將蛋白質(zhì)抗原與弗氏完全佐劑按1∶1（V∶V，下同）進行充分混合后注射，第二、第三次注射與弗氏不完全佐劑進行充分混合后注射，從第四次免疫開始直接注射蛋白質(zhì)溶液[3]。利用Western Blot方法進行多克隆抗體的檢測。

1.2.3 重組蛋白質(zhì)的細菌結(jié)合試驗 將進行細菌結(jié)合試驗的目的細菌菌株進行過夜培養(yǎng)，第二天低速離心收集細菌菌體，用500 ？滋L 1×PBS緩沖液懸起，加入經(jīng)過1×PBS緩沖液透析的500 ？滋L目的蛋白質(zhì)溶液（1 mg/mL），室溫條件下?lián)u床孵育1 h；低速離心后用500 ？滋L 1×PBS緩沖液洗滌5次。之后用7% SDS溶液200 ？滋L孵育菌體，沉淀10 min，離心后收集最后的菌體沉淀和7%的SDS洗脫液。將第五次的1×PBS洗脫液、7%的SDS洗脫液、最后的菌體沉淀作為樣品進行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)膜后利用Western Blot方法檢測結(jié)合試驗的效果，使用的抗體是重組Lv-SWD蛋白制備的多克隆抗體[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 重組Lv-SWD蛋白的純化與多克隆抗體的檢測結(jié)果

大腸桿菌表達菌株經(jīng)過IPTG誘導能夠正確表達重組Lv-SWD蛋白，理論分子量為12.9 ku，由圖1可見，純化后蛋白條帶的大小接近14.3 ku，說明重組蛋白的大小與理論預測值相符。Western Blot分析結(jié)果（圖1）表明，重組Lv-SWD蛋白刺激家兔產(chǎn)生的多克隆抗體能夠較好的識別蛋白質(zhì)本身。

2.2 細菌結(jié)合試驗結(jié)果

細菌結(jié)合試驗結(jié)果（圖2）表明，利用重組Lv-SWD蛋白制備的多克隆抗體識別醋酸纖維素薄膜后，4種細菌的菌體沉淀處都有明顯的條帶出現(xiàn)，說明巨大芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌以及弧菌都能較好的結(jié)合重組Lv-SWD蛋白。

3 小結(jié)與討論

目前，對于抗菌肽分子的研究比較深入，尤其是在甲殼類動物中的研究成果較多。在中國明對蝦、淡水小龍蝦、克氏原鰲蝦、南美白對蝦、斑節(jié)對蝦等動物中分別發(fā)現(xiàn)了甲殼肽、溶菌酶、抗脂多糖因子、對蝦素等免疫效應分子[5]，這些分子多數(shù)具有一定的先天免疫相關(guān)功能，包括抗菌活性、結(jié)合細菌活性、蛋白酶活性抑制作用等。通過研究這些分子的結(jié)構(gòu)特征發(fā)現(xiàn)，一般情況下無脊椎動物先天免疫相關(guān)的抗菌肽分子具有廣泛的多樣性，包括結(jié)構(gòu)多樣性與功能多樣性[6]。在結(jié)構(gòu)方面，抗菌肽分子一般都包括一個典型的結(jié)構(gòu)域，例如WAP結(jié)構(gòu)域、對蝦素結(jié)構(gòu)域、溶菌酶結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域的最重要特點就是具有成對出現(xiàn)的半胱氨酸殘基，數(shù)目一般在8個以上[7]。

為了進一步研究抗菌肽分子的結(jié)構(gòu)與功能之間的聯(lián)系，本研究選擇了凡納對蝦的SWD分子進行了系統(tǒng)研究。凡納對蝦的SWD分子中存在一個單獨的WAP結(jié)構(gòu)域，這個結(jié)構(gòu)域主要由8個半胱氨酸殘基組成。通過結(jié)構(gòu)預測發(fā)現(xiàn)，這8個半胱氨酸殘基可以形成4對二硫鍵，本研究在整個分子中形成一個球狀的實體結(jié)構(gòu)和一個疏水的空穴。通過大腸桿菌原核表達，利用重組蛋白作為抗原，制備了多克隆抗體。從而對分子的細菌結(jié)合功能進行了研究，結(jié)合此前進行的蛋白酶活性抑制試驗，筆者發(fā)現(xiàn)重組的Lv-SWD蛋白具有抑制分泌型蛋白酶活性的作用，也存在直接結(jié)合細菌的功能，因此，推測在先天免疫系統(tǒng)中，Lv-SWD蛋白是一個重要的免疫效應分子，在對抗細菌的入侵過程中應該發(fā)揮著重要的功能。

參考文獻：

[1] DU Z Q，REN Q，ZHAO X F，et al.A double WAP domain （DWD）-containing protein with proteinase inhibitory activity in Chinese white shrimp， Fenneropenaeus chinensis[J]. Comparative Biochemistry and Physiology B： Biochemistry and Molecular Biology，2009，154（2）：203-210.

[2] DU Z Q，LI X C，WANG Z H，et al.A single WAP domain （SWD）-containing protein with antipathogenic relevance in red swamp crayfish， Procambarus clarkii[J]. Fish & Shellfish Immunology，2010，28（1）：134-142.

[3] SUN C，DU X J， XU W T，et al. Molecular cloning and characterization of three crustins from the Chinese white shrimp， Fenneropenaeus chinensis[J]. Fish & Shellfish Immunology，2010， 28（4）：517-524.

[4] LI X C，DU Z Q，LAN J F，et al. A novel pathogen-binding gC1qR homolog， FcgC1qR， in the Chinese white shrimp， Fenneropenaeus chinensis[J]. Dev Comp Immunol，2012，36（2）：400-407.

篇（11）

腦卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)是指腦卒中后出現(xiàn)的以情緒低落、興趣減退、失眠多夢等為主要臨床表現(xiàn)的一種疾病,該病的患病率占腦卒中患者的25%-79%。作為心理性應激源,抑郁情緒通過作用于下丘腦―垂體―腎上腺軸,影響機體內(nèi)腺體功能,產(chǎn)生相應內(nèi)分泌改變。本研究通過檢測PSD患者漢密爾頓抑郁量表及血清皮質(zhì)醇(eortisol,Corl水平,探討智三針結(jié)合五行音樂對PSD患者神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響。

1　臨床資料

1.1　一般資料本研究共篩選出60名符合納入標準的PSD患者,來源于廣東省第二中醫(yī)院康復科2008年3月至2010年5月間住院病例。在獲取知情同意后,按照就診順序編號,查閱SAS8.0軟件產(chǎn)生的隨機數(shù)字表,分配到對照組和治療組。其中對照組29例,男16例,女13例,年齡42-78歲,平均年齡62.5,病程3-14個月,平均7.3月。治療組31例,男19例,女12例,年齡40-81歲,平均年齡64.1,病程2-16個月,平均7.9月。經(jīng)t檢驗,兩組患者年齡、性別、病程方面沒有顯著性差異。

1.2　納入標準及排除標準

1.2.1　納入標準:f1)符合CCMD-3抑郁癥的診斷標準;(2)診斷工具采用漢密爾頓抑郁量表[3](HAMD)24項計分,總分20分為輕,中度抑郁,>35分為嚴重抑郁;(3)愿意受試并能合作的患者,均可納入。

1.2.2　排除標準:(1)器質(zhì)性精神障礙或精神活性物質(zhì)和非成癮物質(zhì)所致抑郁,重度抑郁癥有嚴重自殺傾向者;(2)患者在進行測評前2周內(nèi)接受過任何形式抗抑郁治療的;(3)合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病者;(4)凡不符合納入標準,未按規(guī)定治療。無法判定療效或資料不全等影響療效者。

2　方法

2.1　治療方法對照組:口服氟西汀膠囊20mg,每日一次,連續(xù)服用8周。

治療組:接受智三針結(jié)合五行音樂治療。智三針治療選穴主穴:神庭、本神(雙側(cè)),輔穴:合谷(雙)、太沖(雙)、內(nèi)關(guān)(雙)。操作方法:上主穴,選用環(huán)球牌無菌針灸針(0.3×40mm),直刺25mm,得氣后不做手法,留針60分鐘。以上輔穴,每日選取一個,器械及操作同上,留針20分鐘。針刺治療連續(xù)治療6天,休息1天,共治療8周。五行音樂治療采用聆聽方式進行,每天上午下午定時收聽音響設(shè)備外放音樂1次,每次30min音量控制在60分貝以下,以患者舒適不覺刺耳為度。醫(yī)生根據(jù)患者臨床癥狀,運用中醫(yī)辨證理論,根據(jù)病情累及的臟腑,分別選用角(肝)、徵(心)、宮(脾)、商(肺)、羽(腎)5套治療音樂進行聆聽,五行音樂CD由廣東珠江音像出版社出版,收聽前向患者講述音樂所表達的思想感情,連續(xù)治療8周。

角調(diào)(肝):歡樂歌、三六、云慶、行街、中花六板、花三六、四合如意。

微調(diào)(心):花好月圓、平湖秋月、月牙五更、十面埋伏、金蛇狂舞、寒鴉戲水。

宮調(diào)(脾):彩云追月、漁舟唱晚、漢宮秋月、姑蘇行、雨打芭蕉。

商調(diào)(肺):夕陽簫鼓、昭君怨、蕉窗夜雨、翠湖春曉、柳青娘。

羽調(diào)(腎):紫竹調(diào)、江河水、到春來、平沙落雁、木棉花開、流水行云。

2.2　觀察指標

2.2.1　24項漢密爾頓抑郁量表fHAMD)評定:在未接受抗抑郁治療前,對所有人組患者進行評定。工作由2名專人負責進行,要求其未參與病人的診治工作。治療8周后,對患者進行二次評定。

2.2.2　血漿皮質(zhì)醇的采集與檢測:治療組和對照組均于治療前及治療8周后,空腹抽靜脈血5mL置于EDTA抗凝管中,在4℃條件下、13000r/min離心30min,吸取上清液,-70℃條件下保存待測。血漿皮質(zhì)醇測定采用雙抗體夾心放射免疫法,由GC-1200R放射免疫計數(shù)儀(中國科學技術(shù)大學中佳光電儀器公司)檢測,實驗步驟嚴格按照試劑盒(天津九鼎醫(yī)學生物工程有限公司)說明書操作。2.3統(tǒng)計分析方法本文計量數(shù)據(jù)用(x±s)表示,進行正態(tài)分布檢驗后,采用SPSSIO.O軟件做t檢驗。

3　結(jié)果

3.1　漢密爾頓量表評定比較治療前兩組患者HAMD評定差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性;治療8周后評分同治療前比較明顯降低,均有顯著性差異(PO.05)。結(jié)果見表1。

3.2　血漿皮質(zhì)醇水平檢測比較兩組患者治療前血漿皮質(zhì)醇含量無統(tǒng)計學差異(P>0.05),具有可比性;治療8周后同治療前比較血漿皮質(zhì)醇含量明顯下降,具有顯著性差異(PO.05)。結(jié)果見表2。