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在《論語·述而》中有這樣一段對話：葉公問孔子于子路，子路不對。子曰：“女奚不曰：其為人也，發憤忘食，樂以忘憂，不知老之將至云爾。”意思是說：葉公向子路打聽孔子，子路沒有回答。孔子說：“你為什么不這樣說，他這個人，發憤用功，連吃飯都忘了，快樂得把一切憂慮都忘了，連自己快要老了都不知道，如此而已。”
我們知道，孔子的成就涉及政治、經濟、文化、醫學、養生學等諸多方面，這些無不得益于他發憤圖強、廢寢忘食、勤用腦、善思考的為學精神。大腦是人體生命的活動中樞，精髓和神明高度匯聚之處，人之視覺、聽覺、嗅覺、感覺、思維記憶力等，都是由于腦的作用，這些都說明腦是人體極其重要的器官，是生命要害的所在。大腦具有用進廢退的特點，所以腦健則壽長，腦衰則命短。也就是說，愛學習，勤用腦是促使大腦保持活力的靈丹妙藥。
在工作、學習和生活中，我們不要害怕用腦，因為腦的潛力是驚人的，人的一生，只不過用了腦的20%，還有80%的貯備量。人腦有150億個神經細胞，一生中也只用了百分之幾，所以只要善于開發腦，就不怕腦衰老。腦用得越多，大腦內各種神經細胞之間的聯系就越多，形成的條件反射也越多，腦子就更靈活。科學家經常測試，發現勤用腦的人，大腦不易疲勞，腦神經細胞保養良好，盡管年齡增長，卻能避免老年性癡呆。而整天無所事事、無所用心的人，不僅智力會下降，而且大腦容易萎縮和早衰。古人主張“博學強記”，“博學”可增強記憶，“強記”又可促進“博學”，二者相輔相成，要想達到這樣的目的，關鍵是培養濃厚的學習興趣。老年人身體機能都在退化，大腦也是如此，如果老年人能夠積極有效地參加任何一種需要用腦的娛樂活動，如閱讀、猜謎、下棋、打撲克和做手工藝品等，不僅可以延緩大腦衰老，而且可以預防老年性癡呆癥的發生。
但是，還要切記不要過度用腦，過度用腦會加速腦細胞的死亡。人的腦細胞以驚人的速度在消耗著，雖然腦細胞貯備量是很大的，但加速常用腦細胞的死亡，仍然是導致早衰的一個重要原因。因為人的一生中只有150億個腦細胞，損耗一個就少了一個，因此不要過度用腦。勤用腦與不過度用腦是辯證統一的，中青年人不能過度用腦，老年人要保持適度用腦，這是腦養生的總原則。
所以，當你工作、學習之后，如果感到大腦疲憊，可以用手指梳梳頭，給大腦做做按摩。這樣可使頭部毛細血管擴張，加速頭部血液循環，營養物質可充分供給腦組織，有益于醒神爽腦，加強神經中樞的正常活動，利于智力提高和全身新陳代謝。梳頭時不要用力過量，每次約梳2分鐘左右，梳頭時用手將整個頭皮和面部按摩幾下，然后再梳理一遍，這樣效果更佳。
多讀書可益壽
文/夏建國
古代西漢劉向說：“書猶藥也，善讀之可以醫愚。”意思是說，書像藥一樣，讀書、學習可以醫治愚蠢。
如果從醫學的角度來看，讀書也是可以治病養生的。這是因為，人的健康有兩方面，生理健康和心理健康，二者相輔相成，互為影響。身體健康和心理健康對人都很重要。心是內因，身是外因，身通過心而起作用，心常常反作用于身。
zhu gs, he js. j chin integr med. 2009; 7(1): 6569.
received june 18, 2008; accepted july 22, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text linkout at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
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doi: 10.3736/jcim20090110open access
effects of ligustrazine injection on high glucoseinduced type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 and tissue inhibitor of metalloproteinase1 expressions in human peritoneal mesothelial cells in vitro
guisong zhu, jinsong he
department of nephrology, the affiliated drum tower hospital, nanjing university medical school, nanjing, jiangsu province 210008, china
objective: to investigate the effects of ligustrazine injection on type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 (mmp1) and tissue inhibitor of metalloproteinase1 (timp1) expressions in human peritoneal mesothelial cells (hpmcs) cultured in high glucose conditions.
methods: hpmcs were isolated from human omenta by trypsin digestion method and subcultured. then, the hpmcs were divided into normal control group, high glucose group and high glucose plus low, medium and highdose ligustrazine (10, 20 and 40 mg/l ligustrazine respectively) groups. semiquantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction was used to detect the expressions of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 mrnas in hpmcs. proteins of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 in culture supernatants were measured by enzymelinked immunosorbent assay (elisa). cell protein concentration was measured by trace bicinchoninic acid method to correct the elisa assay results.
results: ligustrazine injection could significantly decrease high glucoseinduced type ⅰ collagen and timp1 expressions in a dosedependent manner both in protein and gene levels (p<0.05, p<0.01). in addition, medium and highdose ligustrazine injection could significantly increase mmp1 expression which was inhibited by high glucose concentrations (p<0.05).
conclusion: ligustrazine injection does not only decrease type ⅰ collagen synthesis, but also promote its degradation by modulating unbalanced mmp1/timp1 expression in hpmcs cultured in high glucose conditions.
keywords: ligustrazine injection; human peritoneal mesothelial cells; high glucose; type ⅰ collagen; matrix metalloproteinase1; tissue inhibitor of metalloproteinase1; in vitro
腹膜纖維化是腹膜透析治療的主要并發癥，最終導致腹膜功能衰竭，這是腹膜透析患者退出治療的主要原因［1］。腹膜纖維化以細胞外基質（extracellular matrix, ecm）的過度沉積為特點［2］。研究表明，ecm的過度沉積是由于ecm合成與降解失衡而引起［3］。ⅰ型膠原是腹膜纖維化中主要的ecm［4］，其降解過程受基質金屬蛋白酶1（matrix metalloproteinase1, mmp1）及其特異性抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑1（tissue inhibitor of metalloproteinase1, timp1）調控［5］。有研究證實，高糖能上調腹膜間皮細胞（human peritoneal mesothelial cells, hpmcs）ⅰ型膠原和timp1的表達，降低mmp1活性［3］。本研究通過觀察川芎嗪注射液對高糖刺激下hpmcs ⅰ型膠原、mmp1和timp1表達的影響，探討川芎嗪在防治腹膜纖維化中的作用及其機制。
1 材料和方法
1.1 試劑和主要儀器 川芎嗪注射液（江蘇蘇中藥業集團股份有限公司，批準號為國藥準字h20020630）；50％葡萄糖注射液（江蘇方強制藥廠，批號為200710111）。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution, pbs）、胎牛血清（fetal calf serum, fcs）、trizol和rpmi1640粉劑等（gibco公司）；胰蛋白酶和瓊脂糖粉等（promega公司）；ⅰ型膠原、mmp1和timp1酶聯免疫吸附測定（enzymelinked immunosorbent assay, elisa）試劑盒（adl公司）；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, bca）蛋白含量檢測試劑盒（南京凱基生物科技公司）；ⅰ型膠原、mmp1、timp1和βactin引物，mmlv第一鏈cdna合成試劑盒和taq酶等（invitrogen公司）；抗細胞角蛋白抗體、抗細胞波形蛋白抗體、第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體（北京中山生物技術有限公司）。nu2500e二氧化碳培養箱（nuaire公司）；全自動酶標儀（biobank公司）；生物電泳圖像分析系統（上海復日科技有限公司）。
1.2 實驗方法
1.2.1 hpmcs的培養與鑒定 取來自南京大學醫學院附屬鼓樓醫院普外科擇期腹部手術患者（排除尿毒癥、腹膜炎）捐獻的大網膜組織，按文獻［3］方法原代培養hpmcs，按1︰3傳代，第3代細胞用于實驗，每次實驗均由來自3個患者的標本進行3次獨立實驗。倒置相差顯微鏡觀察hpmcs呈多邊形，似鋪路鵝卵石樣外觀；免疫組化鑒定抗細胞角蛋白抗體和抗波形蛋白抗體染色陽性，抗第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體染色陰性。
1.2.2 實驗步驟和分組 hpmcs用含1％fcs的rpmi1640培養液同步培養24 h后分為5組（每組設3個樣本）：正常組（完全培養液）、高糖對照組（2.5％葡萄糖）和高糖（2.5％葡萄糖）加低、中、高劑量川芎嗪（10、20和40 mg/l）組。各組完全培養液均為含有15％ fcs的rpmi1640培養液。細胞置于37 ℃、5％ co2培養箱培養48 h。
1.2.3 elisa法檢測細胞上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1含量 分組干預48 h后，離心收集上清液，按elisa試劑盒說明書檢測ⅰ型膠原、mmp1和timp1表達水平。用0.1 mol/l naoh溶解細胞沉淀，bca蛋白檢測試劑盒測定細胞沉淀中蛋白質濃度，用相應蛋白質濃度結果校正檢測結果。
1.2.4 半定量rtpcr 分組處理同上。采用trizol一步法提取總rna，2 μg總rna進行逆轉錄合成cdna，50 μl反應體系進行pcr擴增，以βactin作內參照（引物序列及反應條件見表1）。1.5％瓊脂糖凝膠電泳（110 v，15 min）進行pcr產物鑒定，電泳圖像分析儀掃描分析，mrna相對含量用其pcr產物吸光值（absorance, a）與βactin a值的比值表示。引物及pcr反應條件見表1。
1.3 統計學方法 實驗數據用x±s表示，采用spss 15.0軟件進行統計分析，組間差異比較采用單因素方差分析，兩組間均數比較采用lsdt檢驗。檢驗水準α=0.05。 表1 ⅰ型膠原、mmp1、timp1和βactin引物序列及pcr反應條件
2 結 果
2.1 上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1蛋白質水平 與正常組比較，高糖對照組上清液中ⅰ型膠原和timp1含量顯著升高（p<0.01），mmp1含量顯著下降（p<0.01）；與高糖對照組比較，低、中和高劑量川芎嗪組上清液中的ⅰ型膠原和timp1含量顯著降低（p<0.05, p<0.01），且兩者均呈量效關系，中、高劑量川芎嗪組上清液mmp1含量顯著增加（p<0.01）。見表2。表2 各組上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1蛋白質表達
2.2 hpmcsⅰ型膠原、mmp1和timp1 mrna的表達 與正常組比較，高糖對照組hpmcs ⅰ型膠原/βactin mrna和timp1/βactin mrna分別上升（15.43±0.83）倍和（4.19±0.09）倍（p<0.01），mmp1/βactin mrna下降（86.9±0.44）%（p<0.01）；與高糖對照組相比，低、中、高劑量川芎嗪組ⅰ型膠原/βactin mrna和timp1/βactin mrna表達水平均顯著下調（p<0.05），兩者均呈量效關系，中、高劑量川芎嗪組mmp1/βactin mrna表達顯著增加（p<0.05）。見圖1和圖2。
3 討 論
高糖透析液導致ecm過度沉積是腹膜纖維化的病理基礎［2］，研究表明，高糖不僅增加hpmcsⅰ型膠原的表達，并且引起ⅰ型膠原降解酶系mmp1/timp1的表達失衡［3］。我們的研究結果與之基本相同，此外我們發現，川芎嗪能顯著對抗高糖的上述作用。
在生理條件下，hpmcs可以產生一定量的ecm和mmps/timps［3, 6］。mmps是降解ecm的蛋白水解酶系，幾乎能降解全部ecm成分。timps是內源性分泌蛋白，作為mmps的特異性抑制因子，其n'端可與相應的mmps催化活性中心的鋅離子結合而抑制其催化活性［7］。本實驗通過研究川芎嗪對hpmcs在高糖刺激下主要ecm ⅰ型膠原及其降解酶系mmp1/timp1分泌及表達的影響，旨在探討川芎嗪對hpmcs在高糖環境下ⅰ型膠原的合成和降解的干預作用及其機制。結果顯示，川芎嗪能顯著降低高糖所致的ⅰ型膠原的過度合成，同時顯著下調timp1的表達，增加mmp1的表達，提示川芎嗪亦能通過調節mmp1/timp1的平衡，從而促進ⅰ型膠原的降解，減少ecm沉積。由此我們推測，川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用。
川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一，屬酰胺類生物堿，具有活血化瘀的功效。藥理實驗證明，川芎嗪具有擴張血管、改善微循環、調節免疫和鈣離子拮抗的作用［8］。目前川芎嗪抑制ⅰ型膠原、timp1和增加mmp1表達的機制尚不清楚。以往的研究發現這可能與抑制轉化細胞生長因子β1（transforming growth factorβ1, tgfβ1）表達有關［9, 10］。tgfβ1是重要的致纖維化細胞因子，參與了腹膜纖維化的病理過程［2］。tgfβ1可增加ⅰ型膠原的合成，并且抑制mmps的活性而激活timps，使ⅰ型膠原降解減少［3, 11］。有研究報道，川芎嗪能降低多種細胞如心肌細胞、肝細胞和血管內皮細胞的膠原合成和timp1表達，而增加mmp1的分泌和表達，進一步的研究發現這可能是通過抑制tgfβ/smads信號傳導通路繼而抑制tgfβ1表達的結果［9, 10, 12］。我們前期研究證實，川芎嗪能下調高糖致hpmcs tgfβ1的表達（文章待發表）。因此我們推測，川芎嗪抑制tgfβ1的表達可能是其抑制hpmcs ⅰ型膠原合成和調整mmp1/timp1表達平衡的機制之一，其具體機制將是我們下一步要研究的內容。
綜上所述，川芎嗪能抑制高糖致hpmcs ⅰ型膠原的過度合成，并且通過調節mmp1/timp1的平衡，促進ⅰ型膠原降解，從而減少ecm的沉積，防止腹膜纖維化的發生和發展。因此，川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用，這對腹膜纖維化的機制及其防治的研究有一定借鑒和應用價值。
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第六條擔保人提供擔保的期限為自員工（被擔保人）報到入職之日起至員工（被擔保人）與公司解除勞動關系之后六個月內，因特殊情況需要延長擔保期限的，擔保期限另行約定。
第七條擔保人擔保額不低于該員工月工資總額的3倍。
二．總則
第一條為加強公司的內部管理，保證員工遵守公司各項規章制度以及法律法規，防范因特殊崗位員工的失職或違規給公司帶來的風險，維護公司權益，特制定本制度。
第二條公司物流管理部和財務部員工，無論何種用工形式，在接到聘用通知后應馬上著手辦理《擔保書》（見附件）一式三份（公司、擔保人、被擔保人各執一份），并在報到之前交公司核實后方給予辦理入職手續。
第三條公司從事銷售工作的員工無論何種用工形式，從試用期開始，必須交納不少于3萬元的風險保證金。
第四條人力資源部全面負責公司員工擔保的管理工作。
三.擔保資格
第八條擔保人可以是員工（被擔保人）的朋友、近親屬，也可是本公司在職員工（但不可互相擔保），同時必須符合以下條件：
1.擔保人必須是完全民事行為能力人。
2.具備鄭州市戶籍，并且是電力系統員工。
3.在鄭州市有住所并有正當職業及固定經濟收入來源（由擔保人工作單位提供加蓋其單位公章的收入證明）。
四.擔保核對和變更
第九條到公司應聘特殊崗位員工在報到入職前須將其擔保人的詳細資料，提交至人力資源部審核。由人力資源部負責與擔保人簽署擔保書，擔保人還須提供身份證原件供核驗及復印存檔。
第十條公司人力資源部對特殊崗位員工每年核對擔保一次，必要時每半年核對擔保一次或隨時核對擔保。核對方式包括：電話問詢、家訪等。
第十一條擔保人工作單位、住址、電話或相關信息有變更時，員工應馬上通知人力資源部更新擔保人資料。
第十二條如擔保人因故喪失擔保資格，員工應立即自動按規定另行更換擔保。
第十三條發生以上第十一條、第十二條情況而員工不予呈報事后被察知者，視情節輕重予以處罰。
第十四條員工因故須更換擔保人者，應告知理由并另擇擔保人，重新辦理擔保手續，核準后發還原擔保書。
購車方(以下簡稱乙方)：
甲方雙方本著自愿的原則，經協商同意簽訂本協議，以資雙方共同遵守執行。
第一條甲方根據乙方的要求，同意將＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿汽車壹輛；發動機號＿＿＿＿＿＿；車架號＿＿＿＿＿＿，計價人民幣＿＿拾＿＿萬＿＿千＿＿百＿＿拾＿＿元(￥＿＿＿＿)，銷售給乙方。
第二條因資金短缺原因，乙方需向銀行申請汽車消費信貸專項資金貸款，并請求甲方為其貸款的擔保人。
第三條乙方在簽訂此合同時，首先在銀行開立個人存款賬戶、申辦信用卡，并安不低于所購車輛總價的＿＿%的款項，計入民幣＿＿＿＿萬元存入該賬戶。剩余款項＿＿＿＿元向銀行申請貸款，并按期向該銀行歸還貸款本息。
第四條作為乙方貸款擔保人，甲方接受銀行委托，對乙方進行貸款購車的資信審查，乙方必須按甲方要求提供詳實證明資料配合甲方工作，并在貸款未償清之前，必須在甲方指定的保險公司辦妥所購車輛信用或保證保險以及貸款銀行為第一受益人的車輛損失險、第三者責任險、車輛資搶險、不計免賠險及其相關的附加險。在此前提下，乙方按甲方指定場所對所購車輛進行交接驗收，并簽署《車輛驗收交接單》。
第五條乙方在未付清車款及相關款項前，同意將所購車輛作為欠款的抵押擔保物，此抵押物在乙方發生意外且無力償還時，按最長不超過三折舊比例作價給甲方。并將購車發票、合各證及車輛購置附加費憑證交甲方保存，期間不得將所購車輛轉讓、變賣、出租、重復抵押或做出其他損害甲方權益的行為。
第六條在乙方提供停車泊位證明及其他入戶所需證明條件下，甲方可協助乙方辦理車輛的牌、證、保險手續，實際費用由乙方承擔。
第七條在三保期限內，乙方所購車輛如出現質量問題，自行到廠家特約維修服務中心進行交涉處理。此期間，乙方不得以此為借口停止或拖延支付每期應向銀行償還的人款。
第八條如乙方發生下列情況，按本合同第九條規定處理：
1.乙方逾期還款，乙方經甲方二次書面催討，在第二次催討期限截止日仍不還款的(逾期5天后，即發出書面催討，二次催討間隔為7天，第二次催討期限截止日為文書發出日第7天)；
2.乙方借口車輛質量問題，拒不按期償還欠款；
3.發生乙方財產被申請執行，訴訟保全，被申請破產或其他方面原因致使乙方不能按期還款的。貸款未償清之前，不在指定的保險公司辦理本合同第四條所指各類車輛保險；
4.其他情況乙方不能按期向銀行還款；
5.乙方違反本合同第五條的規定，未經甲方同意，擅自將車輛轉讓、變賣、抵押。
第九條乙方承諾，不論任何原因發生第八條的事由之一時：
1.甲方有權要求乙方立即償還全部貸款及利息，并承擔賠償責任；甲方有權持合同就乙方未償還的全部欠款，向有管轄權限的人民法院申請強制執行。乙方自愿接受人民法院的強制執行。
2.甲方有權按合同規定行使抵押權拍賣變賣乙方所購車輛，拍賣所得價款償還全部債款和其他欠款。如果出售所得的價值(扣作必要費用外)不足償還全部欠款和費用總和的，甲方有權向乙方繼續追償，如果出售所得超過欠款和費用總和的，甲方應將超過部分的錢款返還給乙方。
3.甲方有權要求乙方除支付逾期款額的利息外，并按逾期總額的5‰/日計付滯納金。
第十條在分期還款過程中，乙方所購車輛發生機動車輛保險責任范圍內的災害事故，致使車輛報廢、滅失，保險公司賠款應保證首先償還尚欠銀行的貸款及利息部分。
第十一條除車款外，乙方尚須向甲方交納擔保費，金額以借款額為基數，隨貸款年限一次付(一年1%；二年2%；三年3%)。乙方如提前還清車款，從還清日起，甲方自動終止擔保人義務。
第十二條乙方配偶或直系親屬，作為共同購車人，須就此合同內容簽署同意書，作為本合同附件。
第十三條乙方擔保人自愿為乙方分期付款購置汽車擔保，須就此合同的內容簽署擔保書，作為本合同附件。
第十四條本合同按合同條款履行完畢時，合同即自行終止。
第十五條本合同需經公證處公證后生效。
第十六條本合同一式五份，甲、乙雙方及貸款銀行、保險公司、公讓處各執一份。
附件1：同意書
附件2：擔保書
供車方：×企業購車方：
法定代表人：法定代表人：
附件1：
同意書
致：×企業
鑒于＿＿＿＿(購車人)與貴單位于＿＿＿年＿＿月＿＿日簽訂的《購車合同書》購買壹輛＿＿＿＿＿＿型號汽車一事，本人做為＿＿＿＿＿＿(購車人)的配偶(直系親屬)，對春關系存續期間財產享有共同所有權，對債務亦共同承擔義務。為此，特向貴單位確認如下：
一、本人同意＿＿＿＿＿(購車人)將所購汽車低押給貴單位，作為仙款購車所欠款的抵押擔保物。
二、本人愿同購車人共同參與對銀行欠款的償環，直到對銀行的欠款本息全中償還完畢。
三、(若共同購車人與購車人系夫妻關系)倘若購車人與本人解除夫妻關系，除非法院離婚判決書或調解書或經民政部門辦理的離婚協議書中專門注明該車輛所有權和債務的歸屬為購車人，否則不解除本人還款義務。
四、本人已詳細閱讀過了《購車合同書》，充分理解合同經過公證后上有強制執行效力。我同意放棄權和抗辯權。
五、本同意書一經本人簽字或蓋章后即對本人具有法律約束力。
同意人(即購車人配偶)＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿(簽字蓋章)
身份證號：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
簽署時間：＿＿＿＿年＿＿月＿＿日
附件2：
擔保書
＿＿＿＿＿＿＿＿自愿作為汽車消費貸款購車人＿＿＿＿＿＿＿＿的擔保人，承認并遵守以下條款：
一、當購車人未按期償付欠款時，承擔連帶擔保責任。
二、對由于購車人未按期償付欠款而引起的一切相關損失及經濟賠償責任，承擔連帶擔保責任。
Abstract：Objective Regulating telomerase activation is an ideal way to treat cancer . Current studies show that wogonin has the attributes of antioxidation and inhibition on the growth of tumor cells . This study aimed at evaluating the relationship between telomerase activation and apoptosis after wogonin administration in nude mice which implanted human ovarian cancer cells SKOV3. MethodsNude mice with implanted human ovarian cancer cells SKOV3 were randomly pided into five groups， including high dose group ，low dose group ， normal control group ， cisplatin therapy group， and combined therapy group (cisplatin and wogonin) . The expression of hTERT， Bcl-2， Bax and the apoptosis index were detected by immunohistochemistry.Results The results showed that wogonin could significantly suppress the growth of tumor compared with controlled group. The down expression of telomerase activation and the effectiveness was related to the dose of wogonin . With the increase of suppressing on tumor ，the expression of Bcl-2 decrease regularly ， and it showed the opposite tendency of the apoptosis index . While the expression of Bax increased regularly ，and it showed the same tendency with the change of apoptosis expression. ConclusionWogonis can suppress the growth of tumor and regulate telomerase activation. The effectiveness is related to the dose of wogonin ， the effect of wogonin would be better if it is combined with cisplatin in the treatment of tumor . It downregulates the activation of telomerase accompanied with apoptosis of cells ，the possible reason is that it damages the structure of telomerase and switch on apoptosis gene .
Key words：Wogonin;
Tumor of the ovary;
Telomerase； Apoptosis
端粒酶是維持端粒長度、確保腫瘤細胞不退出細胞周期而得以永生化的關鍵之一。85% 的腫瘤細胞表達端粒酶活性，端粒酶的激活與腫瘤增殖密切相關，因此端粒酶成為治療惡性腫瘤的一個理想的靶點。近年來尋找和研究端粒酶抑制劑是國內外研究的一個熱點。本課題組前期研究漢黃芩素表明在體外它具有誘導卵巢癌細胞凋亡作用，能抑制端粒酶活性的表達［1］。本研究通過動物實驗，觀察漢黃芩素對腫瘤生長的抑制作用，并研究其對移植人卵巢癌SKOV3細胞裸鼠組織端粒酶蛋白hTERT影響與凋亡的相關性。
1 材料
1.1 細胞人卵巢癌SKOV3細胞由廣西腫瘤防治研究所提供。培養于含10%的小牛血清，100 u/ml青霉素和100 μg/ml鏈霉素的RPMI-1640培養液中，37℃，5%CO2培養箱中孵育培養、傳代。
1.2 藥物漢黃芩素是從黃芩根中分離出的一種單體，分子量為284 kDa，黃色晶體，其化學性質、理化性質、光譜數據參見文獻［2］。注射用順鉑（凍干型），齊魯制藥有限公司生產。
1.3 裸鼠裸鼠由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，4周齡，約20 g左右，雌性，生產許可證SCXK（滬）2004-0005。
2 方法
2.1 動物分組及給藥將對數生長期的人卵巢癌細胞SKOV3經胰酶消化后，制備成107/ml的細胞懸液，每只裸鼠腋部皮下接種0.2 ml，約2周后接種原位出現腫瘤，成功率為27/30。選取其中25只裸鼠隨機分為5組即：漢黃芩素高劑量A組600 mg·kg-1·d-1；低劑量B組300 mg·kg-1·d-1；常規治療C組腹腔注射順鉑3 mg·kg-1·d-1；聯合用藥D組同時用腹腔注射順鉑3 mg·kg-1·d-1和灌胃給藥600 mg·kg-1·d-1；空白對照E組灌生理鹽水10 ml·kg-1·d-1；采用灌胃給藥開始治療，共用藥10 d。停藥7 d后處死所有裸鼠，取瘤塊并分成約0.1 g/份，福爾馬林固定，石蠟包埋。常規HE染色。
2.2 檢測裸鼠組織中hTERT，Bcl-2，Bax蛋白的表達方法采用抗生素-生物素過氧化酶復合物（S-P）免疫組化法。
組織切片0.4 μm， 55℃烤片過夜，常規脫蠟，高壓修復抗原，PBS洗滌3次。3%H2O2孵育，室溫5～10min，H2O2要覆蓋組織，PBS洗滌3次，滴加1:100的1抗，孵育1 h。PBS洗滌3次。滴加生物素標記的第2抗體，37℃，10～15min， PBS洗滌3次。DAB顯色，用中性樹脂封片。
對照設置：陽性對照片染色步驟同上述；陰性對照片用PBS代替一抗；其余步驟同上。
2.3 檢測裸鼠組織中凋亡指數表達(TUNEL法)組織切片，常規脫蠟，20μg/ml的蛋白酶K室溫下消化20 min，PBS洗5 min×3次。3%H2O2甲醇液阻斷內源性過氧化物酶20 min。PBS洗5 min×3次。3%牛血清白蛋白阻斷20 min， PBS洗滌，TUNEL反應液，60 min，PBS洗3次，加入轉換液，37℃，30 min。PBS洗滌3次。DAB顯色，3～5 min，蘇木素染10～20 min，電吹風吹干，中性樹脂封片。
對照設置：陽性照片為加TUNEL反應液前用DNA酶Ⅰ消化30min，陰性對照片不加TUNEL反應液中的TdT，其余步驟同上。
2.4 免疫組化判斷
2.4.1 對照染色每批染色的陽性對照片應顯示為陽性，陰性對照片應顯示為陰性，否則整批片重染。
2.4.2 免疫組化染色陽性判斷標準hTERT蛋白陽性反應位于胞漿和胞核中表達；Bcl-2，Bax蛋白陽性反應位于胞漿內表達，呈棕褐色或棕黃色。
2.4.3 免疫組化染色分級在全片上、下、左、右、中各隨機選取一個400倍視野，觀察每個視野中陽性細胞的染色強度及該強度細胞占視野中所有癌細胞的百分率。
分級：按陽性細胞占總細胞數的百分率分4級，I級：5%～25%；II級：26%～50%；III級：51%～75%；IV級：﹥75%。≥5%作為陽性標準，
陽性細胞的染色強度分為4級：1級：（±）；2級：（+）；3級：（++）；4級：（+++）。各陽性對照片的染色強度定為4級作為參照。
一個視野的免疫組化染色得分［6］=該視野中的各種染色強度與該強度陽性細胞的百分率級別的乘積之和，即染色強度為1級的陽性細胞百分率級別×1＋染色強度為2級的陽性細胞百分率級別×2＋染色強度為3級的陽性細胞百分率級別×3＋染色強度為4級的陽性細胞百分率級別×4。該組織的免疫組化染色綜合得分=5個視野的免疫組化染色得分之總和÷5。
2.4.4 細胞凋亡判斷及記數凋亡細胞核固縮呈圓形或橢圓形、藍黑色，染色體沿核膜形成半月狀或新月狀，部分核凝固成致密小圓球形。光鏡下隨機選取5個以上高倍視野，每個視野不少于1000個細胞，按陽性細胞占細胞總數的百分率作為凋亡指數。
2.5 統計學分析用SPSS13.0統計軟件，數據以均數±標準差表示，兩樣本均數的比較用t檢驗。多個樣本均數的比較，方差齊用q檢驗法，方差不齊用秩和檢驗；率的比較用確切概率法；相互依存關系的檢驗用方差分析F檢驗。
3 結果
3.1 腫瘤組織病理學觀察各組裸鼠解剖時均未見胸水、腹水；聯合組瘤體最小，易剝離，血供較差，切面灰白，并有液化壞死區域。顯微鏡下見對照組癌細胞生長旺盛，形成癌巢，細胞形態不規則，大小不等，核大呈圓形或卵圓形，核膜增厚，核分裂相較多。藥物作用后聯合用藥D組癌細胞呈大片壞死，結構不清，大部分癌細胞崩解，偶見殘余的癌細胞，間質纖維化，角質物質增多癌組織發生退行性變化，高劑量A組、低劑量B組及常規治療C組癌細胞變性壞死，偶見核分裂相，部分癌細胞核固縮，腫瘤退行性變較對照E組明顯。各組HE染色見圖1。
3.2 裸鼠腫瘤組織hTERT蛋白表達hTERT蛋白陽性表達大部分在胞漿，少部分在胞核，（見圖2）。染色綜合得分比較（見表1）。各用藥組與對照組比較，有統計學差異（P
3.3 裸鼠腫瘤組織Bcl-2蛋白表達Bcl-2蛋白陽性表達在胞漿，（見圖3）。染色綜合得分比較（見表2）。各用藥組與對照組比較，有統計學差異（P
3.4 裸鼠腫瘤組織Bax蛋白表達Bax蛋白陽性表達在胞漿，（見圖4）。染色綜合得分比較（見表3）。各用藥組綜合得分高于對照組，有統計學差異（P
3.5 裸鼠腫瘤組織凋亡指數的變化表達凋亡細胞核固縮呈圓形或橢圓形、藍黑色，染色體沿核膜形成半月狀或新月狀。部分核凝固成致密小圓球形，（見圖5）。凋亡指數的變化（見表4），其直方圖，（見圖6）。各用藥組與對照組比較，有統計學差異（P
凋亡指數：聯合用藥D組>高劑量A組>順鉑常規化療C組>低劑量B組>對照E組。
3.6 裸鼠組織不同組hTERT，BCl-2及Bax染色綜合得分比較根據表1～3，將測定各蛋白表達的結果匯總，獲得直方圖。見圖7。表4 裸鼠腫瘤組織凋亡指數表達（略）
從圖7結果可知，hTERT與Bcl-2表達： 聯合用藥D組對照E組。
4 結論
細胞凋亡(apoptosis)是細胞在一定生理或病理條件下，遵循自身的程序，自我結束生命的過程。它是一個主動的、高度有序的、多基因控制的、一系列酶參與的過程，BCl-2，Bax是與凋亡最相關的調控基因。
Bcl-2最初是從人的濾泡性B細胞淋巴瘤中分離出來的，它定位于人第18號染色體，在淋巴瘤中極易發生染色體易位t（14；18），使Bcl-2與14號染色體上IgH基因并列導致過度表達，是至今為止研究最深入、最廣泛的凋亡調控基因之一。Bcl-2基因表達產物是一種細胞內膜蛋白，主要位于線粒體內膜、內質網和核膜［3］。通過抵抗多種形式的細胞死亡，延長細胞壽命，使細胞數目累積增多而促進腫瘤的形成。本實驗結果顯示，裸鼠腫瘤組織空白對照組Bcl-2染色綜合得分最高，隨著漢黃芩素和順鉑作用后抑瘤率的增強，Bcl-2染色綜合得分下降，表明Bcl-2與腫瘤形成有關。Bcl-2的抗凋亡機制有以下幾種可能：①Bcl-2具有膜轉運功能，能抑制細胞內質網Ca2+的釋放，而細胞凋亡中DNA消化需要Ca2+依賴性核酸內切酶參與，推測Bcl-2可通過改變細胞器的Ca2+來抑制凋亡［4］。②Bcl-2能夠抑制線粒體膜通透性轉運孔開放和維持線粒體跨膜電位，進而阻止線粒體內細胞色素C和凋亡誘導因子的釋放，從而抑制凋亡［5］；③Bcl-2通過其BH4結構與Ced-4/Apaf-1結合，扣押Apaf-1/capase-9復合物或抑制其形成，進而抑制凋亡［6］。本實驗發現裸鼠組織經藥物作用后，隨著藥物抑制腫瘤作用的提高，Bcl-2蛋白表達逐漸下調，與凋亡指數變化的表達呈相反變化趨勢，可能與漢黃芩素抑制Bcl-2基因表達有關。
Bax是1993年克隆成功的一種基因，其翻譯產物與Bcl-2蛋白大約有21%的氨基酸序列同源，也被稱為Bcl-2家族成員之一，其作用與Bcl-2相反，能促進細胞凋亡［7］。Bax蛋白廣泛分布于人體許多細胞和組織中，而在多數腫瘤組織及細胞系中表達下降［8］，在腫瘤形成過程，Bax大量激活或表達，通過促進細胞凋亡，抑制腫瘤形成。有研究發現轉染Bax基因不僅可使多種細胞發生凋亡，而且可使放射線和化療藥物等許多因素誘導細胞凋亡［9］。本實驗發現，隨著藥物抑制腫瘤作用的增強，Bax蛋白染色綜合得分增加了，裸鼠組織Bax蛋白表達與凋亡指數變化的表達呈同向變化趨勢，可能與漢黃芩素促進Bax基因表達，從而誘導了細胞凋亡有關。
腫瘤的發生，一方面源于腫瘤細胞過度增殖，另一方面與細胞凋亡相對不足有關。端粒酶與凋亡的關系引起了人們極大的興趣［10］。Fu等［11］通過對嗜鉻細胞瘤細胞PC12中的觀察發現端粒酶活性隨Bcl-2表達增強而升高，Bcl-2的抑制劑可使端粒酶活性迅速下降。張百紅［12］等研究證明苦參堿能顯著抑制SGC-7901胃癌細胞的Bcl-2的表達；凋亡抑制基因Bcl-2能夠調節端粒酶的活性，當Bcl-2過量表達時，端粒酶活性增強；當Bcl-2表達量下降后，端粒酶活性也下降。Mahitosh等［13］研究表明，抗凋亡基因Bcl-2過度表達和凋亡基因Bax表達下降可導致端粒酶活性顯著增加。本實驗也發現，經漢黃芩素作用后隨著濃度增加，抑瘤率的提高，凋亡現象逐漸明顯，端粒酶hTERT蛋白、Bax蛋白表達逐漸下調，而Bcl-2蛋白表達逐漸增強。端粒酶活性、hTERT蛋白的下調伴隨Bax蛋白表達的增強、Bcl-2蛋白表達的減弱，說明端粒酶與凋亡密切相關。無限增殖是腫瘤細胞的生物學特征，增殖失控關鍵在于端粒酶的激活；同樣凋亡調控功能失調也與腫瘤的形成有關，可以推測凋亡相關基因Bcl-2，Bax直接或間接參與端粒酶活性的調控。下調端粒酶活性，同時也伴隨細胞的凋亡，可能是藥物對端粒活性的抑制和對端粒結構的破壞，啟動了凋亡基因。然而端粒酶的活性調節是一個復雜的系統，漢黃芩素如何抑制端粒酶活性、怎樣調節凋亡相關基因如Bcl-2，Bax而發揮作用機制仍不明確，需要我們進一步通過信號傳導通路來證實。
參考文獻
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［11］Fu Wm，Begley JG，Michael W，et a1．Anti-apoptotic role of telomerase in pheochromocytoma cells［J］. Biol Chem，1999，274(1l):7264.
探親旅游簽證
(一)、申請赴德國探親簽證的手續
德國移民法規定具備下列條件之一者，可以申請前往德國探親：
(1)德國公民的配偶；
(2)德國公民的父母(包括養父母)、子女(包括養子女)；
(3)德國公民的兄弟姐妹(包括同父異母或異父同母的兄弟姐妹)；
(4)其他適合德國法律規定可以探親的外國公民。
中國公民前往德國探親或旅游，可持下列的證明材料前往德國駐華使領館申辦簽證：
(1)在德國的親屬朋友的邀請信件；
(2)在德國的親屬朋友出具的、經過當地外國人管理局或律師所公證的經濟擔保書；
(3)申請人所在地公證機關出具的親屬關系證明；
(4)申請者身體健康證明(入境居留超過3個月的需此證，居留不超過3個月的則不需此證)；
(5)有效的中國護照；
(6)填寫簽證申請表(居留不超過3個月的填2份，超過3個月的填3份)，申請表上須貼照片。
上述證明材料，申請人可以委托中國旅行社代辦轉交大使館，也可以用郵寄方式遞交德國駐華大使館或上海領事館。
(二)、申請旅游簽證的手續
申請有效期不超過3個月的德國旅游簽證，須遞交以下材料并符合下列條件：
(1)認真填寫并貼上照片的黃色申請表，一式2份；
(2)有效護照；
(3)德國的某一旅行社的預訂證明，證明中須寫明旅游日程安排、往返和當地交通及住宿情況，團體旅游者須有個人的預定證明(旅館、旅行情況)；
(4)交付旅行費用證明；
(5)醫療保險證明(保險公司證明)每人一份；
(6)用德文或英文書寫的工作單位提供的證明：工作崗位，月工資，準假證明。
(三)、探親旅游入境居留的規定
德國對外國人入境和居留還規定：
(1)外國人前往德國探親，獲得入境簽證后，還應申領居留許可證。可先委托在德國的親屬朋友事先向外國人管理局申請代辦，也可在入境后再申辦。
(2)入境后如果變更居留地點，要及時向外國人管理局報告。
2、證明遺贈撫養協議,收費10~50元; 3、證明印鑒屬實,證明副本、節本、譯本與原本相符、證明影印件與原件相符,收費5元; 4、證明遺囑、遺贈、證明產權、證明查無檔案記載,收費10元;
5、證明法人資格、收養、財產分割、證明產品抽樣檢測,收費10~30元;
6、證明擔保書、證明公司章程、資信情況等有關文書,收費50~200元;
7、證明商標注冊,收費50元;
8、證明勞動保險金、養老金、子女助學金的,每件收費5元;
9、證明招標、拍賣、開獎、收費100~150元;
10、證明勞務合同,收費5元;
11、起草、修改合同文本,收費5~20元;
12、證明股票、房屋轉讓、買賣、土地使用權有償轉讓的,按股票面額或房價的千分之三收費,但最低收費不得低于10元;
13、證明財產繼承、贈與:
接受益人收金額總數收費
(1)不滿1萬元的,按1%收費,但最低收費10元;
(2)1萬元以上的,按2%收費。
14、證明債權文書有強制執行效力的,按債務總金額的千分之三收費,原債權文書經過公證的,按千分之一收費,最低收費10元。
15、翻譯,每千字15元,不足千字的按千字計。
外文打字,每千字2元。
外文校對,每千字5元。
16、保管遺囑或其他文件、證據保全,收費5~10元。
17、已受理的立卷中途撤回的,收費2~5元;
18、證明經濟合同、企業承包、經營合同:
(1)標的總額不滿10萬元的,收費10~50元;
(2)10萬元以上不滿50萬元的,收費100元;
(3)50萬元以上不滿100萬元的,收費300元;
(4)100萬元以上不滿200萬元的,收費600元;
(5)200萬元以上不滿300萬元的,收費1000元;
(6)300萬元以上不滿400萬元的,收費2000元;
日本的簽證分為長期簽證和短期簽證兩種：居留期限在1年以下的為短期簽證，1年以上(最長為3年)的為長期簽證。長期簽證主要包括留學簽證、學術交流簽證、教育傳授簽證、普通工作簽證、高級勞務簽證。還有若干種類特殊簽證，如日本孤兒、日本人的中國配偶等，以及因公務的外交、新聞、貿易簽證等。
按照日本入境管理法的規定，外國人有一定的專業特長的，日本允許他們在日本居留一定的時間，從事一定的工作。通常能夠獲得在日本長期居留的幾種簽證有：技術簽證、工作簽證、被撫養者簽證、特殊簽證等。
1.技術簽證
包括代號為4－1－7和4－1－12兩種簽證。外國人中的專家教授、講師、醫生、翻譯和各種技術人員，如果被日本有關企業或科研機構、學校雇傭，可以獲此簽證。入境后，一般允許居留1年，以后再憑雇傭證明申請延期到3年。這些入境者的配偶和未成年子女，也可以同時入境居留。
2.工作簽證
簽證的代號為4－1－13，是發給各種熟練工人的入境簽證。例如，接受雇傭的中國廚師，受日本人或華僑開設飯館的雇傭，可以以此種身份入境。這種入境簽證有效期為1年，對有特殊技能的勞工，1年期滿后，可以申請2次延期，居留3年時間，3年居留滿后，必須出境。而后，他們在國外再重新申請入境，可繼續居留3年。只要有雇主雇傭，每隔3年就可以重新入境1次，不受入境次數的限制。
3.被撫養者簽證
通常是指在日本華僑的父母、配偶或未成年子女，可以申請此種簽證。簽證期限一般為簽證期滿后，可要求延期居留，以后可以得到3年有效的居留簽證，都可長期居留下去，這類簽證實質上就是移民簽證。
4.特殊簽證
這種簽證主要是發給具有日本血統或與日本有血緣關系的人，有效期為3年，可以申請延期，直至取得永久居留權利。按照日本有關法律規定。連續在日本居留10年以上，就能獲得永久居留權，如日本血統人、日本公民的外國籍配偶、對日本有顯著貢獻者，這類簽證實際上是移民簽證。
日本簽證的有效期限，除外交及公務護照外，原則上過境和觀光簽證為4個月；其他簽證為6個月。有效入境次數，原則上僅限一次，再度入境時必須重新進行簽證。例外者，如果確認屬于必要，也給予2次或數次有效簽證。
申請途徑
根據日本法律的規定，不同種類的簽證，應按照不同的方式進行申請。技術簽證與工作簽證，應當由聘請或雇傭部門向當地的入國管理局提出申請，即申請入境許可。申請時必須提供聘請書、合同書、擔保書等證明材料。入國管理局呈報法務省核準后，便發給一份有簽證代號的《號留資格證明書》向日本駐華大使館或領事館申請簽證。
被撫養者簽證和特殊簽證，一般由申請人直接向日本駐華大使館或領事館申請即可。申請時出具親屬關系證明，擔保證明或工作采用證明。在日本出生的，出具戶籍譽本就可以，而不再出具其他證明。從申請到取得入境簽證，一般需要3個月至半年左右。
申請日本簽證通常可有兩種方式：一種是由申請人在國外向日本使領事館提出申請。一種是由旅居日本的親友向所在地的入國管理局提出申請。無論采取哪一種方法，最后都是經過法務省批準后，授權大使館或領事館簽發入境簽證的。
1.向日本駐外使領館申請的程序
無論是做工，還是定居等，均可以由申請人直接向日本駐在當地的領事館申請簽證。填寫簽證申請表格，遞交與申請事由相應的證明材料。然后，由日本大使館或領事館將有關檔案材料報回日本外務省，外務省轉送法務省，再由法務省會同有關部門共同審核。申請高級勞務簽證的，則需送到通產省核準。如無不同意見，再由外務省批示駐大使館或領事館簽發簽證。從申請到取得簽證，一般需要3個月左右時間。
2.在日本國內向入境管理局申請的程序
加拿大是一個由世界各地移民組成，靠移民發展壯大的國家，但加拿大不把自己定位為多民族國家。而是定位為多元文化國家，表示對來自世界各地的移民兼收并蓄，一律平等。移民也一直成為加拿大人口增長和經濟發展的基本條件。每年成功申請加拿大身份的中國人都在3萬人以上。加拿大政府2009年的永久居民移民目標是24萬～26.5萬人。
最適合人類居住的地方
自然環境美麗，這是大多數新移民對加拿大的第一印象。加拿大位列7大工業國之一，經濟高度發達，環境同樣無與倫比，雪山碧海、湖光山色散發著無窮魅力。地廣人稀，許多地方還處于未受明顯干擾的原始狀態。另外，加拿大人的環境保護意識十分強烈，許多人都在致力于環境保護工作，政府的環保法令也非常嚴格。加拿大人為此非常自豪，頗有點“誰不說俺家鄉好”的味道。
加拿大人的富裕程度和生活質量在全世界名列第一。在聯合國計劃開展署公布的人類發展世界報告申，每年采用自然地理、資源氣候、環境質量和人民生活居住條件、醫療衛生水平、社會福利保障、人均壽命、教育水平、實際人均收入等多項要素綜合評價，加拿大已連續7年蟬聯“最適合人類居住的地方”這一美譽。
一人成功全家移民
主申請人條件合格而獲準移民，則配偶及未成年子女將自動獲得移民資格。加拿大在世界先進國家中被列為“社會主義化的資本主義國家”，有令人羨慕的社會福利政策，最主要的有：終身免費醫療，完全免費的12年義務教育，優厚的社會福利金、老年養老金，兒童牛奶金等。
加拿大鼓勵各族裔保留發揚自己的文化，這和同是移民國家的“民族大熔爐”――美國形成鮮明對比。另外，與美國的緊縮移民政策不同，加拿大熱情歡迎海外各地的移民。并且，加拿大沒有種族歧視，社會治安穩定。對于難于到達美國或難于留在美國、歐洲及其他非移民國家的華人，移民加拿大后既可以自由方便地進出美國及世界各地，又可以享受比美國等國家犯罪率低、無歧視的社會環境。
加拿大護照――世界通行證
住滿3年后，移民就有資格申請取得加拿大國籍。持加拿大護照可以全世界通行，自由出入100多個國家。可以免簽證人境的國家包括：美國、英國、澳大利亞、新西蘭、丹麥、芬蘭、挪威、瑞典、瑞士、德國、意大利、比利時、巴西、新加坡、西班牙、葡萄牙以及沙特阿拉伯等國。
同時，加拿大承認雙重及多重國籍。為了吸引更多的移民，加拿大還打算修改移民法，將入籍時間放松至“移民在加拿大住滿2年就有資格申請取得加拿大國籍”。即使不入加拿大籍，有加拿大永久居民簽證之后，申請前往第三國的簽證也容易很多。比如，現在瑞士政府對持有加拿大永久居民簽證的某些第三國公民給予免簽證進入瑞士的待遇，中國公民在此范圍之內。
華裔商人回國投資獲優惠
在取得加拿大公民身份后，華裔商人回國經商在經營和稅收上將享受特別的待遇。一般表現為地方政府大力扶持，在部分行業經營上給予特殊政策優惠，減免國家與地方稅收全額，放寬特定行業的經營范圍等。
拓寬子女的發展空間
在加拿大，任何公民只要年滿5歲，都可以選擇居住區內的公立學校人讀，高中畢業之前的12年教育所有費用全免。上大學只需通過高中畢業考試，可通過教育基金為孩子儲存上大學的費用，即只要每年存入銀行固定賬戶2000加元，政府就會每年貼補400加元直到孩子18歲，當然這筆錢必須完全用于孩子上大學。此外，也可靠政府提供的助學金、學校頒發的獎學金或者申請低息甚至無息的學習貸款來完成學業。
如果想在國外得到高薪的職位或較高的社會地位，沒有一個被廣泛承認的文憑是不行的。加拿大的文憑在全世界都得到承認。有了移民身份。在加拿大攻讀學位的學費與加拿大公民相同，只相當于海外留學生的1/3～1/4，籌不到錢可以貸款。如果失業，政府還會發給補貼讓其去參加培訓或讀書。
移民加拿大之途徑
移民加拿大主要有以下途徑。
投資類移民
聯邦投資移民、魁北克投資移民均屬此類。申請人須具有實際經營或高級行政管理經驗，且擁有不少于80萬加元(約合人民幣496萬元)的個人總資產值。所需費用如下。
投資款 按照加拿大投資移民的申請要求，在經過面談并獲得批準后，申請人需要履行一個投資義務，可通過兩種方式實現：一是投資40萬加元(約合人民幣248萬元)到政府指定的基金會，5年后由政府擔保收回全部本金，但無利息收入；二是一次性支付12萬加元(約合人民幣75萬元)作為40萬加元5年的利息，此投資款不能收回，也是移民申請人的主要移民成本。
申請手續費用 主要包括申請費用(魁北克省申請費、聯邦申請費和登陸費等)、文件處理費用(翻譯費、公證費、財務報表的審計費和房產報告評估費等)以及由移民顧問公司收取的咨詢服務費。該費用一般為十幾萬元人民幣。
技術類移民
技術移民是最主要的，也是最可行的形式之一。技術移民屬于獨立移民的一種形式。簡單地說，就是憑申請人的文化程度、職業技能、語言及適應能力等方面的綜合實力來申請移民。一般應有大專以上學歷，年齡21～49歲，英語或法語熟練，有一定工作經驗且從事職業需符合加拿大緊缺職業列表。所需費用如下。
申請費 由移民局收取。主申請人550加元/人，配偶及22周歲以上隨行子女550加元/人，22周歲以下隨行子女150加元／人。
移民登陸費 該費用可退還。主申請人、配偶490加元，人。
間接費用 申請過程中，會產生諸如咨詢費、服務費、公證費等的間接費用，約3～5萬元人民幣。如果自行申請，則只需公證等費用。
企業家移民
申請人須具有經商經驗，擁有足夠的資金，且有能力在加拿大創辦企業或收購現成生意，此為有條件簽證。既投資人取得移民簽證后，要在3年內創辦或者收購1個企業，如果不能完成則會被命令離境。
自雇類移民
申請人具有能力自我創業以及促進加拿大經濟發展或提升該國文化、藝術生活，且擁有約20萬加元的資產值。適合一些文化或藝術專業人士申請，且必須以記分方法評審。
依親／家庭團聚移民
申請人由已合法居留于加境的親屬簽具擔保書，并取得加拿大移民部加簽確認，以支持申請。包括居民或公民申請配偶、父母、子女等。只需提供收入證明有能力供養親屬，條件比較寬松。
移民要慎重
一場意外導致由F2到F1
到美國留學的人都知道，在申請留美簽證時，自己的留學生簽證叫F1簽證，而配偶去美國陪讀時申請的簽證叫F2簽證。所以好多陪讀的人，都戲稱自己是:F2。
陶靜就是美國田納西州大學機械系博士生牛磊的妻子，在牛磊來到美國田納西州大學讀博的第二年，她也就自然而然的申請F2來到美國，與老公一同在美國生活。陶靜原本是國內知名大學的碩士畢業，來美國的目的就是想照料老公牛磊的起居生活，希望他能夠早日完成博士課程。而牛磊呢，在學校是全額獎學金，每月1500美金，兩個人生活，小康稱不上，但也足能夠解決二人的溫飽了。但陪讀的生活并不像兩人想象的那樣，老公專心讀書，老婆操持家務，而變成了兩個人一起讀書，成了真正的“陪讀”。
陶靜來之前，牛磊為了給老婆一個驚喜，也為了日后兩人生活的方便，新買了輛汽車，陶靜剛剛踏上美國的土地，來到學校里，牛磊就迫不及待的想向老婆展示一下他們的新車。傍晚，天剛剛擦黑，二人就來到停車場，開動自己的新車子。不知是二人剛剛團聚興奮的原因，還是因為牛磊剛剛買了車子，技術還不夠嫻熟所致，總之，在打算把車子開出停車場的時候，誤把油門當剎車，一連撞了六輛車子，其中一輛情況嚴重，五輛不同程度的刮傷。由于車子是剛買的，還沒有來得及上各種保險，這一下可把倆人嚇壞了！陶靜回憶當時的情況說：“我當時腦子里一片空白，一句話也說不出來了，牛磊也傻在那兒了。興奮的感覺一下子就凝固住了。”
沒有保險，六輛車子的賠償金不是一筆小數目。陶靜怎么也沒有想到，陪讀生活的第一天，不像別人說的那樣，洗衣服做飯，成為幸福的小婦人，而在這場油門當剎車的車禍中結束了她剛踏上美國之路的興奮。當時他們曾經想怎么樣去償還這筆賠償金，陶靜想到了回國找工作，因為以F2的身份是不允許打工的，也就是說她只能花錢不能掙錢；牛磊想到了申請個人破產，在美國的法律中是允許個人申請破產的，但是這樣對今后的生活會有影響，這會記錄在案，跟著自己一輩子。
倆人還在發愁怎么解決的時候，各個大學又開始了招生，許多在國內的同學都托他們打聽一些學校的情況，什么住宿條件、獎學金的數額等，牛磊此時突發奇想：“不如陶靜你也申請讀博士吧，你條件好，全獎是沒有問題的，每月1500美金，兩人就是3000，一個月下來能攢不少，這樣錢就可以還上了”。陶靜想想，F2不能打工，沒有收入來源，不如去讀個書，有獎學金還能再讀個學位，何樂不為？
“我沒想到，F2的生活是那么短暫，為了還上賠償金，我從F2轉成了F1，本來想在美國做全職太太，沒想到又開始讀書了，這樣到真是陪讀了，陪著牛磊一起讀書，連專業都是一樣的。”陶靜說。
原本以為陪讀生活就會像保姆一樣，與鍋碗瓢盆為伍，誰知道陪讀經歷是各有各的不同。一場意外就改變了陪讀身份。
媽媽陪著我的感覺真好
與夫妻陪讀相比，父母陪伴孩子去國外讀書是目前比較典型的現象。
現在還在新西蘭讀旅游碩士學位的葦葦，三年本科的學習都是由媽媽陪伴她度過的。回想起與媽媽一起在新西蘭的日子，葦葦說：“有媽媽陪讀的感覺真好！”
真得感謝MSN的便捷，記者很容易就得知了葦葦和她媽媽的故事。
在MSN的那一邊，葦葦介紹：按照新西蘭的規定，17歲以下的外籍學生可以申請家人陪讀，申請的手續也很方便。因為我已經過了這個年齡，所以，實際上我媽媽來新西蘭陪我，申請的是探親簽證，不過探親簽證的時間比較短，三個月。好在與一學期的時間相差不多，每個假期我回國，回來后就為我媽媽辦探親手續，就這樣，基本上也算是全程陪讀了。
你別以為我特別嬌氣，都挺大的了還離不開家人的照顧。主要是我從小就是個“病秧子”，常年都是“藥拌飯”，練就了特強的吃藥本領，不管什么藥，拿起來就往嘴里放，一點都不覺得苦。可能是因為這個原因吧，家里人習慣了對我的呵護，到國外他們特別不放心，再加上我一到新西蘭就大病一場，所以我媽媽就只好來陪著我了。
開銷的確是一個要考慮的問題，我媽媽那時候在這里是給外國人作臉，也就是美容，所以她的開銷可以自己應付。因為我爸爸是攝影師，在上海開了個影樓，婚紗攝影需要化妝，媽媽就開始弄美容了。不過媽媽是探親簽證不能打工，只能打黑工，這樣的話，就要看她是否覺得值得，因為，在這里打工都很辛苦，有沒有必要讓父母到這里來受苦呢？我媽媽來是因為我的身體不好，沒辦法。
其實我也很希望她能來，她來了，我什么都不用干，可以專心學習，沒有寂寞感，還是很開心的。
到后來，她自己作美容，再后來我開始跟一些公司簽約工作了。由于工作了錢也不是很緊，所以我們常出去旅游，如果光我一個人是不會去的，因為那時候我媽媽在，我們就常出去玩兒。
如果經濟實力條件許可，去陪讀幫幫孩子的生活，也有助于他們的學習和工作，讓他們發展得更好。
陪讀陪讀，也陪也讀
美國，是很多人向往的，在美國陪讀的人會有怎樣的體會呢？本刊特約記者宗興在美國采訪了一位陪讀的楊女士。
楊女士介紹說：我是跟著我先生來到美國的。我倆原來在國內一所著名高校是同學，先生是研究生，我讀本科。我原來沒有想過要出國，但是到美國讀書一直是先生的心愿。他是學工程的，說希望到美國學些比較前沿的東西。所以他一上研究生就開始準備“寄托”，一陣忙碌之后，2003年8月他如愿來到了美國南部的一所大學求學。
出國之前，我和先生討論到了我們的將來，他說我們結婚吧，這樣你可以出來伴讀。我和家里人去商量，爸爸同意了，但是我媽有點舍不得，她覺得我在國內找份好工作就可以了，沒有必要到一個陌生的國家去。7月份的時候我和先生把證領了。
2004年1月我來到了美國。當時剛過來的時候心情特別激動，人家說“小別勝新婚”，更別提先生在國外了。
說實話，剛來美國挺失望的。覺得小城市的那些建筑比起北京上海來差遠了。剛來一個月，先生說不要太累，好好適應一下美國生活，我說好啊，當時每天在家看看電視。我覺得這些年國內英語教學進步挺大的，我在國內經常看原版影碟，所以在電視上看到這些情景喜劇的時候，不算特別吃力。
先生和我商量，說我們可以先要一個孩子。我現在清閑，可以帶孩子。我同意了，很快就懷孕了。懷孕期間我每天還要自己做飯，因為先生在實驗室工作特別辛苦。他一般早上9點去實驗室，晚上5點多回來吃個飯，然后就又去實驗室了，都要到11點才能回來。有的時候，我會和他一起去實驗室，有的時候就呆在家里看看電視。當時心里挺不高興的，覺得一點也享受不到懷孕的特權（笑）。后來在差不多懷孕8個月的時候，我媽媽就來美國探親了。她每天做飯，我就樂得清閑了。
2005年春天，孩子出生了，是個大胖小子,大家都很高興。先生打趣地說:好不容易作了一回美國人他爹。小生命的到來給我們帶來了無窮的歡樂，但是也很辛苦。晚上孩子一哭，我就要爬起來。剛開始先生也被折磨得特別累，因為他白天還要做研究，我很心疼，就勸他夜里不要起來。當然要不是我媽媽在幫助，真是不知道怎么辦才好。
孩子一天天長大，我就有點在家呆不住了。我覺得這樣不行，因為總是不讀書人就要廢掉了，于是，我萌發了申請學校的念頭。但是實在不想讀博士了，那樣五六年投入時間太長，我打算讀個短平快好找工作的專業。一次在中國學生會舉辦的聚會上，我聽別人說讀會計學挺好找工作的，于是就和先生商量。他剛開始有點猶豫，因為讀這個專業沒有獎學金，后來再仔細想想，也就同意了。年輕的時候還是要讀書啊。
明確了這個目標了之后，我就開始準備GRE和托福了，在這里沒有新東方那樣的氛圍。書本丟了好幾年重新撿起來還是有些難度的。我上個月考完了托福，感覺還不錯，現在正在準備GRE。雖然生活有些艱辛，我每天早晨起來還是挺開心的，覺得有目標，有追求。
如果你要問我后不后悔出國陪讀這個選擇，我覺得并不后悔。因為以前經歷都挺順的，我想出來體會一點艱辛也沒有什么不好。爸爸一直鼓勵我年輕的時候吃點苦沒有什么不好，而且先生讀博士那么辛苦，我這點累也不算什么。我想人還是要向前看，很多東西現在可能看不清，等將來回過頭來看，應該是挺值得。
奉勸一些準備到美國來陪讀的女孩子，如果你吃不了苦，要三思而后行。如果有機會，多學些本事也不錯。
先生回國,我卻留在了日本
在山東大學做教師的安小姐怎么也沒想到要陪先生去日本。并且比先生呆的時間還要長。
安小姐的丈夫在中國社會科學院讀博士時，參加了中日聯合培訓的一個項目，并被學校派去日本研修，這個項目帶有26萬日元的獎學金，本來以學生身份是不能帶家屬的，但丈夫在去日本之前把邀請函、護照等材料全部復印了一份，嘗試著向日本使館申請了“留學滯在”身份，就是家屬的陪讀，沒想到很快就批下來了。
丈夫走后，安小姐開始邊辦簽證邊學日語，由于各種手續比較完善，簽證辦起來也比較順利，沒遇到什么波折。就這樣，丈夫去日本半年后，安小姐也到了日本。
到日本后，由于丈夫的獎學金足夠兩個人在日本的生活費用了，安小姐沒有像其他陪讀者一樣去打工，而是在家照顧著丈夫的生活。但是，由于語言障礙，在買菜、購物中她根本聽不懂別人在說什么，學會和別人交流是她到日本首要面臨的問題。當時，她們居住的公寓小區內有很多留學生，也有很多像她一樣的陪讀者，為幫助大家溝通，社區就成立了幫外國人學日語的小組，小組成員全部是社區內的志愿者或者日本的家庭主婦，她也加入這個日語學習小組一對一的開始接受日本的家庭語言幫教。每到一個家庭拜訪后她都用紙記下所有的對話回家學習。當時，日本東京大學也為留學生的家屬開設了免費學日語的訓練班，她又抓住這個機會去上課。
丈夫一年學習期滿要回國了。但是安小姐卻面臨一個歸屬的問題:如果隨丈夫回國自己還要回到山東大學繼續做老師，如果丈夫博士畢業了可以隨他留在北京，但當時離他畢業還有一段時間；不回國的話沒了丈夫的生活費自己就要去打工賺錢，而且不能是陪讀身份了。想來想去，還是想留在日本，等到丈夫畢業再回國。
就這樣，丈夫給她留下了到日本后積攢下來的生活費回國了。因為自己在國內大學教師的身份，安小姐作為自費研究員的身份留在了丈夫就讀的學校，學校只收取很少的費用。但這剩下的錢還是不夠支撐她一年的生活，恰巧，她學日語的學校貼出了一則招工信息，她馬上去那家餐廳應聘。后來每天的安排就是，上午去自己的研究室搞研究，下午去日語學校學日語，晚上就去一家日本人開的中國料理店打工賺生活費。
緊張的生活鍛煉了她很強的耐力，日語水平也得到了提高，她在日本還嘗試著參加日語的水平考試，居然差四分就達到了最高級！已經回國的丈夫也被她的成績嚇了一跳：這個小女人自己過得蠻不錯嘛。
隨著丈夫博士畢業，她的“陪讀”生涯也結束了。
生活有時候很有戲劇性，不知會得到什么失去什么。抓緊機會充實自己是陪讀之后的最佳選擇。
留學熱門國家陪讀政策
美國:不需經濟擔保
到美國去陪讀就要準備好需要的材料，一般情況下包括本人護照、配偶護照復印件、配偶在美居住證明、結婚證和配偶邀請函等材料。到美國陪讀不需要經濟擔保證明，但會檢查共同生活的費用夠不夠。美國的陪讀生活比較愜意，陪讀可以選個專業上學，也可以打工。
新西蘭:可以申請探親
新西蘭沒有陪讀簽證，按照新西蘭移民局的規定，新西蘭留學生的配偶(含17歲以下子女)可以申請到新西蘭探親。如果留學生課程在一年之內的，其配偶只能作為一般旅行者申請；如果留學時間超過一年，其配偶赴新西蘭需取得訪問簽證，申請這種簽證需提供經濟擔保書、體檢報告、兩人的保證書、結婚證書以及留學生支持其配偶赴新西蘭所寫的信件等。
日本:只有夫妻陪讀
在日本只有夫妻陪讀，而且陪讀時在日本可以工作，但如果要上學則需要重新申請學習簽證。
馬來西亞:要有存款證明
馬來西亞原先不存在陪讀。近些年，隨著國內很多家長把馬來西亞視為去歐美留學的“跳板”，馬來西亞政府采取多項措施鼓勵外國學生到馬來西亞留學，包括允許留馬學生的父母到馬來西亞陪讀。而之前馬來西亞政府規定的25歲以上的中國女性不獲批入境簽證現在也已被取消。也就是說只要有銀行存款證明，也可以通過夫妻關系陪讀。
英國:須有足夠資金
想到英國去陪讀關鍵是必須有足夠兩個人生活的錢，如果資金沒問題，可以辦攜行，甚至可以兩人一起簽出去。
如果配偶中的一方已到英國，有些東西就不得不留心準備了，首先你要讓已經在英國的一方準備銀行賬單、邀請函、在英國的住宿證明、電話賬單、簽證復印件。然后自己在國內也要準備結婚證、單位準假證明。如果在英國的一方的銀行賬單的收入不足以支付兩人的生活費，還要出示存單。英國的陪讀簽證相對歐洲大陸國家來說很好簽，只要錢的方面沒有問題，一般都不會被拒簽。
澳洲:要求比較寬松
也不能失去信用!”
2001年12月中旬，56歲的胡丙申在山西省夏縣鄉鎮企業局長的位置上內退了，老伴王金梅頗為高興，丈夫退休前忙得和家人在一起的時間都很少，現在終于可以和她在家里頤養天年了。
可讓王金梅沒想到的是，丈夫退休的第二天，自家小院里便涌來許多人，這些人既有承包工程的包工頭，也有個體攤販，更有從鄉下趕來的農民，每個人都口口聲聲要老胡還他們的欠款。堂堂局長，竟然欠這么多老百姓的債務，到底是怎么回事呢?
事情還得從十年前說起――
1992年春，為了大力發展鄉鎮企業，胡丙申被縣委寄予厚望，從民政局長的位置上調任縣鄉鎮企業局局長。上任后，胡丙申了解到好多企業因為缺少流動資金已陷于癱瘓和停產，要想盤活現有企業，必須幫他們解決流動資金問題。
隨后，胡丙申做通了縣農村信用社的工作，為符合放貸條件的企業爭取到了一定額度的貸款，有一部分企業其他條件都過關，就是找不到擔保人，胡丙申毫不猶豫地在貸款擔保書上簽上了自己的名字。
就在這時，許多不具備貸款條件的企業也先后找到胡丙申，懇求他利用自己的人際關系，尋求民間資本支持。于是，胡丙申走訪老干部、建筑商，甚至是個體攤販和早期致富的農民，希望他們拿出閑置的資金，有償支持鄉鎮企業的發展。憑著他在群眾中的威信，短短數天就籌借了69萬元，為夏縣中草藥加工廠、四辛莊肉聯廠、禹王童裝廠等鄉鎮企業解了燃眉之急。不用說，胡丙申也成了所有民間借貸的擔保人。
胡丙申沒有考慮到的是，早期鄉鎮企業都是自發的，帶有很大盲目性。沒過多久，一些企業就因產品質量不過關或經營管理混亂等原因，紛紛關門破了產，企業主們紛紛逃往外地躲債。此時，借貸矛盾已經顯現出來，只不過當時胡丙申還在位，大家隱忍不發，沒有把矛盾激化。當胡丙申內退的消息不脛而走后，當年由他經手擔保借貸的債主們紛紛涌上門來，找他討債……
一連好幾天，胡家小院里人聲鼎沸，到了晚上，還有人坐著不走，硬要胡丙申給個說法。有的人甚至惡語相加，胡丙申只能賠著笑臉，說給他些時間，讓他想想辦法。
更大的壓力來自于家庭內部，家人當初對胡丙申給人借款擔保的事就有看法，事情的結局恰恰印證了家人的擔心，就連一向溫和的老伴也忍不住數落丈夫：“你瞅瞅，你都干的什么傻事啊!”
面對家人白天晚上的輪番質詢，胡丙申始終沉默不語。他壓根沒有想到會出現如此難堪的局面，一向以正直、清廉聞名的大丈夫形象，突然間聲名狼藉，讓他的自尊心受到了極大傷害。
那幾天，面對債主無休止地上門討債、兒女們的抱怨和指責，胡丙申幾次來到黃河大橋，對著滔滔黃河水，訴說自己的委屈。有時，他只想縱身一跳，一了百了。可轉念一想，債因自己而起，我不能愧對曾經相信我的人，不能愧對我的親人，尤其不能帶著罵名離開人世。
接下來，胡丙申選擇了主動出擊，他帶著債主去找當年的借錢人，讓債務人擬定還款計劃。可接連半個多月跑下來，除了夏縣植物激素廠等極少數企業簽訂還款計劃并如約履行外，大多數借款企業都已破產、倒閉，當初的企業主們有的亡故，有的不知蹤影。于是，這些債款都落在了胡丙申身上。
無奈，胡丙申和老伴戴上老花鏡，把所有的債務清單進行了整理，核對了多次，“39萬元”的天文數字驚呆了老兩口。緩過神后，胡丙申下定了決心：債因我而起，再多的錢也得還!
人急則無智。胡丙申到鄉下老家清靜了幾天，拿出了周密的還債計劃。在信用社擔保的貸款，本金用自己的工資扣還，利息則由自己按季度支付，這樣最終連本帶息還清，約需12年時間，如果趕上退休工資調高，還款日期還會縮短。
2001年元月下旬，胡丙申分組召集債主座談，確定所有民間借貸利息截止到當天，連本帶息由他在15年內陸續歸還，希望取得大家的諒解。只是，債主們一致商議，最后把還款期限縮短到10年，胡丙申答應了。
胡丙申替人背債39萬元的消息很快傳出，在這個不大的縣城成了特大新聞。有人說他憨，也有人說他好。對大家的議論，胡丙申坦然地說：“我活著是個人，倒了還得爬起來，再怎么難，也不能失去信用!”
寫春聯、開飯館、學理發，
退休局長攜妻艱辛掙錢還債
2002年2月4號，農歷臘月二十三。山西夏縣縣城街頭，一位頭發半白的老者坐在長條桌后面，桌子前面擺著“春聯”的招牌，他的老伴在旁邊幫著招攬生意。有顧客過來，老人就根據客人的要求，自編自寫，來求春聯者絡繹不絕。有熟悉的人從攤位前走過，驚呼起來：“這不是老胡嗎?怎么在街頭賣起字來了!”
不錯，這位被人稱作“老胡”的長者正是胡丙申，寫春聯賣字是他為還債邁出的第一步。隨后，“老局長賣字還債”的消息傳了出去，當年胡丙申曾任鄉黨委書記的禹王、胡張、裴介三個鄉鎮的村民們，感念胡丙申當年的功德，來縣城辦事的時候，也不忘過來讓老書記寫幾副春聯帶回家。
這樣一來，胡丙申的春聯生意十分火爆。直到大年三十，無論刮風下雪，他都堅持出攤。臘月二十八那天，冷風如刀，天空飄起了雪花。老伴勸他不要去寫了，胡丙申說：“鄉親們進城路途遠，萬一來了求不到春聯怎么辦?”老伴只好帶上塑料布又陪著他出去守攤。中午吃飯時，胡丙申也不肯回家，王金梅只好用毛巾裹著飯盒，送來熱騰騰的飯菜。
經過好心人指點，胡丙申用寫春聯賺的錢批發了些花炮，讓老伴負責賣炮。一時，老兩口春聯、花炮同時經營，獲利頗豐，短短幾天居然賺了2000元，初戰告捷讓胡丙申還債信心大增。
2002年春節剛過，胡丙申便在縣城找了家小店面，開起了飯館，昔日的一局之長成了大廚，老伴則是采購員、收銀員、服務員一肩挑。飯館雖小，雜事頗多。每天天不亮，老兩口就爬起來和面燒水，收拾停當還要趕早市買菜，夜里十來點鐘打烊后打掃衛生，最后，還要強撐著盤點一天的收支。
為了省錢，胡丙申都是自己借輛架子車去運煤。老伴怕他體力不支，要雇小工，他笑呵呵地說，這比當年我帶領村民鋪沙蓋堿輕松多了。運煤時，認識他的人不解地問：“胡局長，你怎么親自拉煤啊？”胡丙申笑著反問道：“我為什么就不能親自拉煤呢?”
雖然開著飯店，胡丙申總是舍不得吃，經常是壘個饅頭，上面撒些鹽和辣椒面就算是一頓飯。每當看到丈夫省吃儉用，老伴就流著淚勸他：“咱怎么省都行，千萬不要在嘴里省。你的身體垮了，這一家老小可指望誰呀!”胡丙申總是笑著安慰老伴：“沒事兒，當年我這身體打下的老底子硬著哩!”
兩年飯館開下來，不但錢沒掙多少，胡丙申和老伴卻累瘦了一圈。兒女們心疼父母，不讓他們再開下去了，并決定湊錢幫父親還債，卻被胡丙申固執地拒絕了。
其實，胡丙申一直覺得對兒女們心里有愧。他當局長多年，大兒子參軍提干是自己奮斗的，跟他沒任何關系，女兒至今仍是農村戶口，老伴曾經想讓他給女兒安排個工作上班，卻被他以“不能帶頭搞不正之風”頂了回去。二兒子當兵復員回來時，胡丙申還是民政局局長，按說為城鎮復員兵安置工作是國家政策允許范圍內的事，給二兒子安置工作也順理成章。老伴提出此事后，不料又被他頂了回來，他認為自己身為民政局長，會有利用職權帶頭為親屬安排工作的嫌疑。兒女們從沒有沾過他這個當官的爹什么光，憑什么要跟著他受累?
2004年3月，胡丙申關閉了飯館，在縣城西關租了間門面，開起了理發店。因為店面小，理發師不愿到他這里屈就，胡丙申就拿起理發工具邊學邊=F，由于理發技術不過硬，顧客也很少問津。一年到頭，胡丙申賺來的錢除了繳房租之外，幾乎剩不下錢來。
2005年春節后，胡丙申將理發店關停，轉而經營起了百貨小超市，大到面粉、調和油，小到針頭線腦，經營種類應有盡有。胡丙申讓老伴守店，他天天騎著三輪車巡回于縣城幾家較大的批發部進貨。為了節省每一分錢，出門他都是杯子里灌些白開水，從不舍得買瓶礦泉水，餓了就吃隨身帶的大餅。
遇到進貨量大的時候，為了低幾分錢的進價，胡。丙申就騎著摩托車到運城市批發市場進貨，早出晚歸，一去就是一天，在外面不舍得吃飯，回到家吃飯后還得硬撐著身子點貨擺貨。
2005年冬天的一個傍晚，胡丙申從運城進貨回來，老伴看到他臉色蒼白，疲憊不堪，趕庀把他扶到床上，就要去請大夫。胡丙申虛弱地擺擺手說： “不礙事，休息會兒就好。白天在運城進貨時，我突然感到眼前一黑，天旋地轉，我扶著電桿喘了一會兒就好了!”
王金梅用熱毛巾擦著老伴的臉，有些后怕地說：“多危險啊，身邊又沒有親人。咱們休息幾天，到醫院檢查一下吧!”胡丙申開玩笑地說： “估計是‘腦血栓’找我來了，一看我還有這么多債要還，就高抬貴手把我放了。”
王金梅被老伴逗樂了，繼而又心酸地流起了淚。
“信義”二字何止千金!
老夫妻打工十年終償巨債
2006年，受朋友之邀，胡丙申到運城參與《五千年文明河東人系列叢書》的編撰工作。這份工作不僅能讓胡丙申發揮自己的寫作特長，也有了一份穩定的收入。更讓他欣喜的是，自己的退休工資也從退休時的六七百元調高到2000多元，從此，胡丙申的“還債”計劃駛入了“快車道”。
老伴被邀至運城編書后，王金梅并沒有閑著。秋收時期，她瞞著家人悄悄回到馮村老家，今天給東家摘棉花，明天給西家挖紅薯，甚至連拆房、砌墻的活兒她也搶著干，為的就是一天能賺到20元的辛苦費。
好事的鄉親把王金梅的行動告訴了她的兒女們，孩子們怕母親累壞了，強行到鄉下把母親“請了回來”。王金梅閑不住，又來到運城，在勞務市場找了份給人當保姆的活兒，每月能掙500元的工資。
值得一提的是，憑著日積月累吃苦受罪打零工，王金梅十年間給老伴掙了2萬多元的還債錢。這個善良而又傳統的中國女性，用行動詮釋著相濡以沫、患難與共的夫妻情。
自從參與叢書的編寫后，“胡丙申充分發揮了自己的人脈關系和寫作特長，超額完成采編任務，并享受到一份不菲的獎金。多年打工還債經歷，讓胡丙申對世事、人生有了更為深刻的感悟。編輯叢書期間，他晚上堅持寫作，文章不斷發表在《河東文學》、《運城日報》、《黃河晨報》等報刊上，僅《夏縣人》一家雜志10年間就刊發了胡丙申詩歌、散文、雜文等近百篇文章，他也是在用這種方式告訴債權人：“我胡丙申還活著，請大家放心。”
2009年12月，信用社打電話讓胡丙申來取他的工資本，告訴他信用社的貸款已從工資本上扣完。聽到這個好消息，胡丙申頓時精神一振。在信用社取工資本時，他受到了全體工作人員的熱情接待。信用社主任握著他的手說：“如果貸款人都能像你這樣，我們的工作就好做了。”
讓胡丙申更欣慰的是，信用社貸款還清的同時，其他債務也已基本還清。2010年歲尾，經過十年的臥薪嘗膽，胡丙申終于趕在年終最后一天還上了最后一筆“債務”。當他把兩摞嶄新的百元大鈔遞到對方手中時，債權人感動得說不出話來。胡丙申感到了一種前所未有的輕松。
2011年元旦這一天，胡丙申10年來破天荒地拉著老伴上街買衣服，享受著無債一身輕的感覺。老伴說，應該給你先買，你的棉衣和外罩從里到外都是補丁。
的確，十年間，胡丙申沒有給自己添過一件新衣服，棉衣、棉褲可說是補丁上摞著補丁。孩子們買的新衣服他也不穿，他說這叫臥薪嘗膽。不但如此，他抽煙也從最初的五塊錢“紅河”，降到兩塊五的“哈德門”。胡丙申還自我解嘲說：“魯迅最愛抽‘哈德門，我特別崇拜魯迅。”
那天逛完街回到家，胡丙申把老伴讓到沙發上，用一種欣賞的眼光久久看著她。王金梅嗔怪他說：“你這是咋啦?不認識我了!胡丙申沒說話，輕輕打開眼鏡盒，取出一張兩萬元的定期存單交到老伴手里。
王金梅看著存單一頭霧水。胡丙申深情地說：“老伴啊，這10年你跟著我受苦了，我怕我撐不下來，半道上走了，還債的同時悄悄存了兩萬元，想給你留個保命錢。”王金梅感動得熱淚盈眶。原來，胡丙申連最壞的結果都想到了，而在那樣的壓力下，他心里依然牽掛著妻子，王金梅抱著丈夫失聲痛哭。
胡丙申輕聲安慰老伴說：“過去了，一切都過去了，我們老兩口也要開始新的生活。工資本在咱們手上，錢怎么花全聽你的。”王金梅破涕為笑道：“咱倆每年旅游一個地方，爭取跑遍全中國。”胡丙申補充道：“跑遍全世界。”
看著胡丙申孩子似的神情，王金梅欣慰極了。當年，她出生于一個富商家庭，在“唯成分論”的那個時代，25歲已當上村支部書記的胡丙申冒著政治前程受影響的壓力，毅然和她結了婚。老兩口相濡以沫地過了大半生，老伴有難，她不幫他誰幫他啊!