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2納米生物醫用材料

納米生物醫用材料是納米材料與生物醫用材料的交叉，在人類康復工程中發揮重要作用。納米生物醫用材料將解決臨床對傷口敷料、人造皮膚、人造血管和組織工程支架、高性能組織修復、器官替換的迫切需求［32-34］，而且已顯示出巨大的潛在應用價值。材料支架在組織工程中起著重要作用［35］。模仿天然的細胞外基質結構而制成的納米纖維生物可降解材料已開始應用于組織工程的修復和再生。由于軟骨再生能力有限，軟骨組織工程領域的發展具有重要意義，特別是在治療老齡化社會日益流行的大關節骨關節炎方面［36］。嵇偉平等采用塑性變形和化學處理方法在Ti6A14V合金上制得一種新型多孔納米晶體，通過體外實驗研究了成骨細胞在納米Ti6A14V合金表面的黏附情況。結果表明，與普通鈦合金相比，納米表面鈦合金早期就能使成骨細胞偽足伸展良好，促進成骨細胞緊密貼壁和早期融合，與細胞黏附相關的Integrinβ1的表達也高于普通鈦合金，為將納米技術應用到人工關節等植入器械領域提供了新的方向［37］。還可以將納米骨材料［38］植入體內填充各類型的骨缺損，其網狀結構可生長出很多新生的骨細胞，所有填的納米骨材料，最后會降解消失，骨缺損部能完全被新生骨取代。目前醫用納米羥基磷灰石/聚酰胺66復合骨充填材料已投入市場，對骨缺損的恢復具有較好的作用。納米技術與生物醫學的結合，為醫學界提供了全新的思路，在醫學領域的應用已取得一定成果。但目前大多數研究還處于動物實驗階段，仍需大量臨床試驗予以證實，納米材料應用的生物安全性也有待進一步提高。這就要求生物醫學研究者與納米材料的研究人員合作需進一步加強，制造出更先進的生物醫用納米材料。

3納米診斷學

納米診斷學是納米生物技術在分子診斷中的應用，對于發展個性化治療具有重要意義。目前納米生物技術在臨床診斷方面的研究主要集中在納米生物傳感器［39，40］和成像技術［41，42］、使用制造納米機器人在細胞水平上進行維修，生物標志物的提取及測定等［43，44］領域，以疾病的早期診斷和提高療效為目標。

3.1體外生物分子檢測

超靈敏的生物分子檢測方法可以服務于臨床診斷［45，46］。由于待測分子含量很少，因此，對方法的檢測靈敏度有很高要求。納米材料特有的性質可以極大地提高分子檢測的靈敏度和簡便性［47，48］，人們研究了各種各樣的超微量生物分子檢測的信號放大方法［49，50］。丁良等［51］利用納米晶體中陽離子交換反應釋放的陽離子來誘導熒光染料，用于痕量生物分子的檢測，取得良好效果。實驗表明基于ZnS納米簇的陽離子交換放大器的檢測性能優于酶聯免疫吸附測定法（ELISA），檢測限低1000倍。標志著利用便攜式床旁檢測設備檢測生物標記物成為可能。

3.2體內診斷

3.2.1注射PEG-Glu-GNPs后腫瘤的輪廓很容易與周圍組織區別開來，這種復雜的探針可以實現體內疾病的早期診斷，大大有助于癌癥或癌轉移的早期發現［52］。另外開發體內神經遞質參與腦化學的監測是一項具有挑戰性的工作，有助于進一步理解生物分子在病理和生理上的作用。Liu等［53］報道了一種新型的封裝有金納米顆粒的玻璃毛細管來感應大腦多巴胺，結果表明，全氟磺酸改進Au/GCNE可成功用于監測麻醉大鼠紋狀體的多巴胺。Kempen等用光學顯微鏡和掃描電鏡定位、觀察金納米粒子聚集的腦腫瘤模型，發現納米顆粒僅在含有腦腫瘤細胞的區域內聚集，在正常腦組織周圍沒有發現［54］。3.2.2量子點（半導體納米晶體）量子點是以CdSe為核、CdS或ZnS為殼的核-殼型納米體，具有優良的光譜性能。水溶性的量子點在生物化學等研究領域顯示了極其廣闊的應用前景。它的細胞毒性低，可用于活細胞及體內非同位素標記的生物分子的超靈敏檢測。李朝輝等［55］利用反相微乳液技術，以CdTe量子點為核，SiO2為殼，一步制備了表面帶有氨基和磷酸基團的核殼型量子點熒光納米顆粒.該顆粒水溶性好，大小均勻，有效改善了CdTe量子點的不穩定性，成功實現了對肝實質細胞的識別。由于量子點技術有其獨特的標記特點，它必將成為今后生物分子檢測的尖端技術，為DNA檢測（DNA芯片）、蛋白質檢測（蛋白質芯片）和探索蛋白質-蛋白質之間（抗原-抗體、配體-受體、酶-底物）反應原理提供更先進的方法。同時也將極大推動生物顯像技術和生物制藥技術的迅猛發展，給疾病的診斷和治療帶來巨大進步。3.2.3納米磁性顆粒較大尺度的磁性納米顆粒呈現鐵磁性，在交變磁場的作用下可通過磁滯現象產熱，用于癌癥的靶向熱療［56］。而粒徑小于20nm的磁性納米顆粒通常顯現出超順磁性，可被廣泛應用于臨床診斷領域。目前在臨床診斷方面較為成熟、發展較快的應用主要包括：磁共振成像、生物分離、細胞篩選等。（1）磁共振成像（MRI）作為一項新的醫學影像診斷技術，近年來發展十分迅速，所提供的特有信息對診斷疾病具有很大的潛在優越性。利用超順磁性氧化鐵磁性納米顆粒在生物體組織內的特異性分布，有助于提高該部位腫瘤與正常組織的MRI對比度，因而作為造影增強劑被應用于MRI，進行腫瘤及其他疾病的診斷［57］。（2）生物分離。因磁性納米顆粒具有易操控性、比表面積大等優點，使功能化的磁性納米顆粒的應用具有很大的吸引力［58］。當前磁分離的研究涉及生物領域的多個方面，如血液中金屬離子的去除，蛋白質、核酸等的富集、固定化酶的回收與重復等［59］。Yan課題組［60］利用磁性氧化鐵粒子作為載體固定蛋白酶A，并利用其能夠與乙肝病毒表面抗原抗體發生特異性結合的性質，達到測定乙肝病毒的目的。（3）細胞篩選。當組織或血液中僅有微量癌細胞的時候，通過特定的技術就可以精確地檢測到，從而實現對疾病的早期診斷和治療，必將為病人獲得寶貴的治療時間，提高治愈率。所以細胞篩選具有重要的意義。免疫磁珠細胞篩選法可在幾分鐘內從復雜的細胞混合物中分離出很高純度的細胞。Mousavi等［61］等開發了一種新型的與金納米條結合的微流控芯片，利用高效免疫磁珠法捕捉人血中極少量的細胞，可以達到簡單而有效的檢測高純度目標細胞的目的。可以預見，在未來，更加精確的細胞篩選技術將是一個非常熱門的研究方向［62］。雖然功能化的磁性納米材料已經有了廣泛的應用，但如何設計更簡單的制備過程和更新穎的功能化方式以使材料本身具有更好的分散性和使用壽命，仍是研究者們探索的方向.3.2.4納米生物傳感器在癌癥研究領域，利用納米技術制成的傳感器可望使各種癌癥的早期診斷成為現實［63］。納米傳感器靈敏度很高，在進行血液檢測時，當傳感器中預置的某種癌細胞抗體遇到相應的抗原時，傳感器中的電流會發生變化，通過這種電流變化可以判斷血液中癌細胞的種類和濃度。目前越來越多的風險投資正在涌入這一領域，但這一技術在實用中還有一些技術難題需要解決。今后可能會有多種納米傳感器集成在一起被置入人體，以用來早期檢測各種疾病。3.2.5生物芯片生物芯片是基因生物學與納米技術相結合的產物，它不同于半導體芯片，它是在很小的幾何尺度的表面積上，裝配一種或集成多種生物活性分子，僅用微量生理或生物采樣，即可同時檢測和研究不同的生物細胞、生物分子和DNA的特性，以及它們之間的相互作用，獲得生命微觀活動的規律。具有集成、并行和快速檢測的優點，生物芯片技術已經成為21世紀生物醫學工程的前沿科技。基于納米結構陣列的蛋白質芯片和微流控芯片技術在診斷學和生物傳感技術方面的應用具有巨大的潛力［64］。Ali等［65］制備的基于氧化鎳納米棒的微流控生物芯片，采用電化學檢測法來測定人體血液中的總膽固醇濃度，線性范圍為1.5-10.3mmol/L，靈敏度高達0.12mA•mmol-1•cm-2。DNA芯片技術可以快速分析大量的基因信息，從而使生物醫學工作者可以研究并收集基因表達和變異信息，還可用于監測不同的人體細胞和組織基因表達，以檢測癌癥或其它疾病所對應的基因的變化。3.2.6納米機器人納米技術與分子生物學的結合將開創分子仿生學新領域。“納米機器人”是根據分子水平的生物學原理為設計原型，設計制造可對納米空間進行操作的“功能分子器件”。以色列科學家研發出一種“膠囊相機”，將攝像頭內置入比普通感冒藥稍大的膠囊內，以大約每秒14張照片的頻率拍攝消化道內的情況，并同時傳回外置的圖像接收器，可進行人體消化道腫瘤監測。還可將納米機器人注入人體血管內，進行全身健康檢查，疏通腦血管中的血栓，清除心臟動脈脂肪沉積物，用于動脈粥樣硬化的治療；可吞噬病毒，殺死癌細胞；可將納米機器人以插入導管的方式引入到尿道或膽道里內，直接到達結石所在的部位，并且直接把結石擊碎，進行腎結石、膽結石的治療；還可進行人體器官的修復工作、作整容手術、從基因中除去有害的DNA，把正常的DNA安裝在基因中，這樣可以從根本上治愈遺傳缺陷或病毒，使機體正常運行。未來發展趨勢是當機器人醫生發現可疑病變組織后，立即能伸出“手”來取樣進行活檢。納米機器人在體內的生物傳感與智能配送生物活化劑有很大潛力［66］。

4納米材料和納米生物技術的安全性問題

隨著納米技術的迅速發展，不可避免地導致含有納米顆粒的工業廢水的排放［67］，納米材料的潛在的免疫毒性機制所引起的不良反應還沒有得到足夠的重視［68］。納米顆粒可直接穿透人體皮膚引發多種炎癥；可穿透細胞膜，將異物帶入細胞內部，對人體腦組織、免疫與生殖系統等方面造成損害等。如二氧化鈦容易在飲用水中聚集，從而污染環境、影響健康。接觸二氧化鈦納米微粒后，人體肺部將可能出現炎癥。銀納米顆粒目前已被大量使用。研究表明，即使它在環境中的聚集量很低，也會對水中無脊椎動物造成傷害。碳納米管是工業和實驗所需的材料，注射了碳納米管的老鼠會產生動脈粥狀化、線粒體脫氧核糖核酸損傷等反應。當攝入量較大時，對肌肉細胞也有毒性，會對人體健康有不利影響。但盡管納米生物技術的應用有一定安全性的問題，它的應用也會越來越廣泛，同時這也為納米技術將來的發展指明了方向——如何提高其安全性問題是研究的目標之一。

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二、新興美容整容行業的發展方向

醫學美學,作為醫學領域中一個新興的獨立的系統科學，是醫學和美學原理交叉的學科。“要求學生掌握的是如何實施對人體的美學研究、美學維護、美學修復和再塑人的健康之美”現代醫學美學的興起與和醫學審美的更高層次發展，促進了研究與實踐并取得顯著成果。但是目前也出現了各種問題，出現了很多整容美容事故，主要原因是不了解美學規律，不遵循美學規律地亂動刀子。

三、數字媒體介入前兩者結合中的運用前景

（一）、教學中的運用。對整個專業知識體系的實踐教學環節進行了改革創新,結合多媒體、投影儀等教學工具，利用計算機采集圖像數據、計算機圖像處理技術,配合攝像機及相應測量用軟件,作為測量分析用具,啟用醫用美學等軟件虛擬測查數據結果。使教學更直觀更具體化。

（二）是與客戶交流的運用，面向特定的群體發展到面向特定的一個人、一個家庭的階段。即是精確化傳播階段，能和受眾（客戶）保持一對一互動，受眾能較易獲得個性化信息，并能通過先進的媒體及傳播技術經濟地、方便地滿足不同受眾的個性化需求。

（三）推廣傳播的運用。大眾傳播、分眾傳播，與精確化傳播相對應。在互聯網、社交網站中使用網頁、廣告等媒體市場推廣體系，最大化數字媒體的營銷效果。

四、數字媒體介入美學教學實踐的改革

（一）美學基礎知識體系的完善

1、既要了解美學基礎知識，又要了解醫學基礎知識。美學主要包括美學基礎知識和基本技能、人體整體美學與各部位美學分析評價技能。醫學美學主要包括實踐指導手冊、醫學美學概論實訓教程等。通過綜合課程體系學習，鞏固美學和醫學美學理論課程的基本知識和基本概念。

2、要配有專門的美學與醫學美學實踐教學畫室和實驗室，配備各種實踐教學器材。

（二）軟件與工具的廣泛使用

利用圖形軟件平面與3D結合，有效地進行人體美學測量，分析與評價的技能應用與實施于臨床。選用計算機、攝像機、自制攝像用頭部固位架、圖像采集卡、相應測量用軟件,作為測量分析用具,尺子、量角規等，整形美化軟件。

（三）課程教學實踐改革

在講解分析中，多與醫生交流醫學美學的理論與原理，結合臨床實際，分析事物與美學的關系及其成因，進行分析并提出措施或建議，培養學生對美學與醫學美學理論原理的應用能力。

1、集體講解，多媒體播放，與醫生共同講解相關解剖知識，養成科學的觀點去看待和解決問題。如頭面部的三停五眼分析與測量，對比例不協調除了使用化妝技術可以改變，還需要微整形或者手術整形改變，需要向醫生咨詢以及完全了解問題的解決。如，瘦臉針、除皺針的恰當使用。

2、素描示范步驟和范例作品講解。用素描方法描繪照片和寫生對象，只有掌握了藝術手段熟練處理問題的能力，才能更好地運用進行計算機圖形軟件處理出需要的效果。藝術手段和計算機的修改可能更加隨心所欲，但是醫學要遵循規律，是需要將對象的個性與標準規律反復進行比對。審美的修養顯得十分重要。如。教師先分析對象特征，再示范觀察方法、比例、結構，表現基本手法，再讓學生分組練習，教師同時進行巡視指導，培養學生動手實踐能力和創新能力。

3、利用各種軟件分析真實照片和虛擬美容整形效果，比較各種數據在審美的差別，認識解剖知識的重要性突出計算機的運用能力和動手能力的培養，啟發學生自己動手，使實踐教學具有規范的動手能力和臨床實踐操作技能。如，打開photoshop軟件，將搜集到的照片導入，拉開輔助線，選中鋼筆路徑作為傾斜鋪助線和修改的描畫。點擊標尺工具進行測量。然后采用人體模型測量或者同學之間互相進行測量，寫出實驗報告，將最后得出的結果做出虛擬效果圖。用VPSS、IFACE等軟件，目前這些軟件還不夠強大，需要結合photoshop軟件使用，最強的是韓國的3D整形軟件syncromaxplus，需要加強對3D軟件的學習，制作出更真實性的3D效果圖。可以很有效的幫助整形醫生的手術。

4、實踐課堂案例式教學。就美學與醫學美學課程教學及教育過程中的有關典型問題，或學生關心的現實生活中的見聞，或學生自己容貌方面的憂慮煩惱等，作為實踐課堂案例來進行教學。例如，比較典型的東西方數據差別，加強民族審美意識，不盲目整形。

五、專業實踐、企業實習

實行產學結合，在全省范圍內確立了教學實習基地，讓學生到實習基地去見習實習學習，如參與美容醫院的各種美容治療或美容手術的實習見習，實習見習各階段寫出美的切身體會與實驗報告。參加美學與醫學美學講座、學術交流等活動。讓學生熟悉美容業的生產、建設、管理、服務工作，為美容第一線職業崗位輸送高素質的應用型人才打下基礎。

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1引言

生理學的知識大部分是通過實驗獲得的，所以生理學實驗在整個教學環節中占有非常重要的地位。因此，在實驗教學中，怎樣才能有效的組織生理學實驗教學,怎樣能使抽象的理論和復雜的操作變得簡單化，如何提高學生的積極性和主動性,增強實驗教學效果,是目前生理學實驗教學需要重要改進和探索的課題之一。通過實踐證明，把多媒體課件引入到實驗教學中，能更有效的提高教學質量。以下是我在教學實踐中，對將多媒體教學融入到傳統教學中有何優點談的幾點體會，以供參考。

2多媒體組合教學能較好解決教學中的重點和難點

傳統的實驗教學是老師利用板書進行講解，學生對于實驗的原理和操作的理解和觀察是靜態的，而生理學動物實驗內容較為抽象、手術操作難度較大。對教師來講,傳統的講授方式很難將其中涵蓋的內容完全用語言講清楚；對學生來講,從未接觸過手術器材及手術操作，聽起課來很吃力，很難完全清楚掌握手術步驟。例如家兔的頸總動脈插管技術,以前是在黑板上畫一個頸部手術示意圖。示意圖很難體現頸部解剖層次、結構和毗鄰組織。這樣,學生在分離頸總動脈時很容易出錯,甚至導致實驗失敗。據統計,傳統教學方法在動物實驗中,成功率為70%左右。而現在使用多媒體教學，老師在講授實驗操作時，先配合圖片進行講解，使學生大致了解各個部位的解剖結構。再讓學生觀看一遍動物手術錄像,通過完整的錄像演示對動物進行麻醉、固定、切開皮膚和肌肉、分離血管和神經、頸動脈插管等全過程,使學生對手術操作有個初步概念,手術部位的解剖層次、結構和毗鄰組織一目了然；然后,帶教老師結合實際進行講解。最后學生自己動手進行操作。這樣,學生對手術器械及操作步驟了解清楚,操作動作較規范,操作速度較快,實驗成功率高。我們統計,使用多媒體課件教學后,生理學實驗的成功率達到95%以上。如果個別組實驗失敗,該組同學可以通過觀看錄像和學習成功組實驗結果，達到實驗目的。通過多媒體課件的使用，可以克服在傳統教學中出現的弊端，使學生感受直觀，記憶深刻，學生可以通過推理及形象思維而記憶，大大提高了學習的效率，使學生掌握教學中的重點、難點，達到了實驗課要求的效果。

3充實了課堂信息，擴大了教學容量

生理學實驗的內容多，但是授課時間偏少，要使學生在有限的時間內掌握全面的、基本的操作知識是很困難的。然而多媒體課件能把教師從大量的講解、板書和示教中解脫出來，借助多媒體的優勢，對信息進行優化處理，它利用文字的閃現、圖形的縮放與移動、顏色的變換等手段，不僅容量大，速度快，效果也更好[1]。使得教師在有限的時間里講述更多的信息，從而擴大了教學容量，節約了時間，增加了學生動手操作的機會，對于培養學生的動手能力和實驗操作能力，起了很好的作用。

4對教師自身素質的提高，起到了很大的促進作用

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根據《河北省醫療衛生機構醫學裝備管理實施辦法》第2章第8條“醫學工程技術人員與床位的配比不少于1：200”的規定，6家三甲級醫院共有床位15000張，應配備醫工人員75名，實有32名，只占規定人數42.7%。其中人員最短缺的醫院醫工人員只有2名，僅占規定人數的16%。人員的短缺使分工不細，常常一個人負責多方面的工作，只能在繁重的工作中，疲于應付，沒有時間去鉆研新業務，學習新知識。因此，技術含量較低，只能維修一些小設備和基礎設備，工作效率不高。

（2）專業人員少，職稱普遍不高。

在32名醫工人員中，有高級職稱的僅6人，占總人數的18.7%；醫學工程專業畢業的有18人，占總人數的56%，其他的都是從后勤部門調配過來的或者是部隊復員轉業人員，當中也包括沒有任何學歷的電工、機修工等。這些人員雖能掌握某一方面、某一專業的實踐知識，但因缺乏必要的基礎理論，缺少跟蹤先進醫學工程技術的潛能，致使技術單一，發展后勁不足，難以具備維修大型儀器設備所需要的技術能力。

（3）從業人員年齡老化，結構不合理。

在32名從業人員中，年齡＜35歲的，僅有7人，占總人數的21.8%。容易出現人才斷檔現象。

（4）維修手段落后，設施不完善。

由于醫院長期以來對醫學工程技術不重視，致使技術手段落后，設備陳舊。現在大多數醫院給醫學工程技術部門配備的工具非常簡陋，基本上是鉗子、螺絲刀加萬用表，在維修過程中多數是憑借個人經驗來判斷故障所在。隨著醫療設備的集成化、模塊化、計算機程度越來越高，很多設備使用了大規模集成電路、貼片元件、多層電路板等元器件，單靠這樣的維修設備和個人經驗已遠不能適應實際需要了。三甲級醫院的情況已不容樂觀，其他醫院的情況更糟。綜上所述，石家莊地區醫院的醫學工程技術人力資源短缺，技術水平低，不能有效地保證醫療設備的安全運行。

2形成現狀的原因

（1）醫院對醫學工程技術工作重視程度不夠。

大多數醫院“重采購，輕醫工”，領導層往往把提高經濟效益作為主要目標，認為采購管理人員能夠帶來直接的經濟收益，可以給醫院節約大量資金，而醫學工程技術工作既需要人力，又需要財力，工作成效還不明顯，還不如請廠家或第三方維修更方便快捷。因此，常把其當做后勤班組來管理，對醫工人員的培養、使用、晉升、工資待遇等方面都不夠重視，使醫工人員產生了強烈的不平等感。另外，醫院也沒有很好的激勵機制，干多干少一個樣，干好干壞一個樣，嚴重挫傷了醫工人員的積極性。

（2）優秀的醫學工程技術人才流失嚴重。

目前醫學裝備市場發展迅速，醫療器械公司（含醫療器械維修公司）如雨后春筍般地冒了出來，據不完全統計，石家莊市每年新增此類公司達200家之多，因此，需要大量的專業人才。他們可以提供更為優厚的條件，比如高出醫院幾倍的薪酬，提供更多學習、進修甚至出國深造的良好機會等。醫院內外待遇的強烈反差，造成了醫院很多優秀的醫學工程技術人才的流失。

（3）醫學工程市場的激烈競爭。

隨著醫療設備市場競爭的白熱化，各生產廠家對售后工作的重視程度越來越高，再加上眾多第三方維修公司的加入，使醫學工程市場逐漸規范和成熟，他們有高素質的維修隊伍、完善的工作制度、合理的獎懲機制、維修響應時間快、維修價格也趨于合理。而醫院的很多醫工人員沒有危機意識，缺乏學習新知識和新技術的動力和精神，工作懈怠、服務態度差、技術水平低。因此，很多醫院寧愿選擇廠家或第三方維修公司，也不愿意多增加醫工人員。

3對策

（1）醫院領導要高度重視醫學工程技術工作。

醫院領導應該清楚地認識到，很多醫療設備雖然都能使用，但是否符合國家規定的使用標準，它的參數、功能等是否符合要求，僅僅靠出了故障找廠家或第三方公司維修，是解決不了所有問題的，要想徹底解決只能靠醫院自己的醫工隊伍。因此，醫工人員理應成為醫院建設中一支不容忽視的技術生力軍。醫院領導要重視部門建設、學科的發展和人員的培養，盡快改變醫學工程技術落后的局面。要改變目前的局面，醫院應該做好以下幾點工作：①配備足額的專業人員，使他們可以細化分工，實施精細化管理。在配備人員時，要盡量選擇高學歷、高能力的醫學工程技術專業人員，同時要注重人員梯隊建設和培養，不可急于求成；②加大資金投入，配備先進的維修設備和質控設備。要學會用質量控制設備檢測日常使用的醫療設備參數、功能等是否符合規定的要求；③重視醫工人員的繼續教育和再培訓。醫院應將醫學工程技術做為一門專業學科來發展，使其享有同臨床醫技科室一樣的地位，在教育和培訓方面與醫護人員一視同仁，給他們提供足夠的學習、進修和參加各種專業技術培訓機會，以提高醫工人員的技術水平和管理水平；④提高待遇，建立健全激勵機制。醫工人員服務于臨床，要求隨叫隨到并且快速準確地解決問題，技術含量高、工作壓力大，醫院應該提高他們的收入，并在職稱晉升、人才使用與培養等方面予以照顧。同時通過崗位職責、勞動績效、勞動態度、技能等指標對他們進行動態考核，并與待遇掛鉤，以加強工作責任心，充分調動工作積極性。

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(2)“粉筆+黑板”的教學模式，由于教學手段單一、呆板，課堂氣氛死板、沉悶，不利于激發學生的想象力和創造力，學生的聽課積極性不高，教師的創造性思維也受到了抑制，容易使教師因循守舊、不思改進，一本教案用幾年，以至知識老化，創造性思維枯竭。

(3)醫學教學素材眾多，難以長期保存。

(4)醫學知識繁瑣、復雜，課堂上老師苦于難把大量的知識傳授于大家，多數老師一味填鴨式的講授，不僅不會增加學生學習的效率，還會使學生產生厭煩情緒。學習資源和信息。

2多媒體技術在醫學教學中的重要性

(1)計算機多媒體技術把枯燥無味的知識形象、滿足不同學生的不同需要，使得學生在一定時間內盡可能獲取更多的知識。

(2)多媒體技術可以節省板書時間，大大提高了課堂效率，還可以增加與老師溝通互動的機會。

(3)多媒體技術的應用改變了傳統醫學教學過程單調枯燥的局面，完全可以在課下依靠網絡加強學習，而且多媒體技術實現了資源的共享，為學生提供了更多的

3多媒體教學在醫學教學中應注意的事項

多媒體教學在醫學教學中產生了重大的變革，但是，應用多媒體時，應將多媒體作為教學的助力，不能成為教學的絆腳石。所以，使用多媒體技術時，應注意以下幾個方面。

(1)避免遏制學生的想象力。這就造成教師在課堂上過多的進行電腦操作，引導學生按照課件的指示進行學習，在一定程度上抑制了學生的想象力。

(2)避免重回填鴨式教學。多媒體技術的廣泛應用使教師的板書量大大減少，造成學生沒有足夠的時間進行思考，導致教師無法全面的掌握學生學習的具體情況，對于教學中存在的問題不能及時發現和改正。

(3)避免過度依賴多媒體教學，使教師學生之間失去互動性。學生也不會再認真地去做筆記，整理自己的學習思路和知識體系，而是變得更愿意去依賴拷貝教師的教學資料。

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人工處理信息是有很大缺陷的。第一，速度慢，手寫字符平均為40字每分鐘。第二，人工的處理繁雜的醫學信息出錯率很高，一旦出錯，甚至會導致嚴重的醫患關系。還有，人們憑著自己的感覺直覺在識別信息上是很弱的，在推斷和概率估計上存在著很大的主觀傾向，這是萬萬不行的。如上的種種局限性在醫學信息管理中會嚴重影響信息的及時性，準確性以及適用性。醫學信息管理的中的各類信息，是在診療康復過程中相互依賴，環環相扣的。任何一個環節的出錯都會引起“水波效應”，使整個有機整體處于紊亂狀態，影響工作的進行。

1.2計算機技術在醫學信息管理中的優越性

眾所周知，計算機以迅速，準確，可靠和擁有極大的儲存能力為突出優點被廣大工作者所喜愛。而且，其計算和分析能力遠遠的超過人工可能達到的最大程度。計算機用于處理醫學信息適應了其信息量大，面寬的特點；與醫學信息處理的及時，準確的要求相適應。通過計算機技術的支持，從根本上改善了醫學信息管理人員工作性質和條件。所以，計算機技術用于醫學信息的處理，是醫學現代化管理的重要手段。繁雜的醫學信息一旦引入了計算機技術，就會提高管理的效率，減少錯失，保證醫療過程科學而協調地進展，對病人，對醫生，對有的醫療機構乃至整兒社會，都有著極其深遠的影響。

1.3辯證地看待計算機技術在醫學信息管理中的作用

有著計算機技術的支持，我們不能否認醫學信息管理更協調，更有效率；但是，計算機也不是萬能的。計算機技術在應用過程中，尤其在信息采集方面，對于涉及面廣的信息很難實現計算機化，自動化。而且，計算機畢竟是機器，在靈活性方面就明顯的沒有人工有優勢。因而，在信息管理過程中，要通過計算機與人工相結合的方式來對信息進行管理；才能讓信息不但具有準確和高效性，也有一定的靈活性。所以，因才施用，才能更好的發揮計算機技術在醫學信息管理中的作用。

二、對計算機技術教學方式的建議

計算機技術的運用，對于醫學信息的管理意義是重大的。兒如何將兩者有機的結合起來則是我們醫務工作者的事情了。當今時代，每個醫療機構在每個季度，都會有一定的計算機教學，對象上至院長下至護士，可見其重要性。因此，一個良好的教學方式就顯得更加重要。多媒體教學相對于枯燥乏味的照本宣科有如下優勢：

1、直觀性，能突破視覺的限制，多角度地觀察對象，并能夠突出要點，有助于概念的理解和方法的掌握；

2、圖文聲像并茂，多角度調動學生的情緒、注意力和興趣。

3、動態性，有利于反映概念及過程，能有效地突破教學難點；

4、交互性，學生有更多的參與，學習更為主動，并通過創造反思的環境，有利于學生形成新的認知結構；

5、通過多媒體實驗實現了對普通實驗的擴充，并通過對真實情景的再現和模擬，培養學生的探索、創造能力；

6、可重復性，有利于突破教學中的難點和克服遺忘；

7、針對性，使針對不同層次學生的教學成為可能。

8、大信息量、大容量性，節約了空間和時間，提高了教學效率。通過多媒體教育，是的醫務工作者快速的，有效的，持久的掌握計算機技術與醫學信息技術的結合使用，這不僅僅使利醫療機構本身構成更加精準，有效，有機，更是讓病人得到了很大的便利。

篇（7）

在內科學課程設計時要明確高職醫學影像技術專業人才培養目標：為基層醫療衛生系統培養緊缺人才。經過3年時間，使學生成為適應基層醫療衛生事業改革，掌握醫學影像技術基本理論及技能，能從事放射診斷、超聲診斷等工作的高素質應用型人才。

1.2應具備的能力

掌握基礎醫學、臨床醫學基本理論知識和臨床技能等；熟練掌握常見病的放射診斷、超聲診斷基本知識、理論，具備從事醫學影像診斷臨床工作的能力；具備正確的思維方式和綜合運用相關知識分析解決臨床問題、做出正確影像診斷的能力。

1.3主干學科、主要課程

該專業主干學科包括基礎醫學、臨床醫學、醫學影像學。主要課程包括內科學等。

2高職醫學影像技術專業內科學理論教學課程設計

2.1突出高職醫學影像技術專業特色及就業崗位需要的知識

高職醫學影像技術專業學生文化基礎較薄弱，對學習公共課、專業基礎課、綜合素質類課程興趣不高。因此，內科學課程設計不能模仿和照搬本科課程，也不能把中專的課程簡單地組合起來。高職醫學影像技術專業人才培養模式必須進行相應改革，才能適應社會，尤其是基層醫療單位對人才的需求。通過適當精簡、融合、重組、增設等，打破原有課程設計界限，優化課程和教學內容體系；突出職業能力培養與崗位技能訓練，以突出操作能力、注重臨床教學、加強技能實踐、適應基層需要為原則，設置醫學影像技術專業內科學課程體系。近年來我們按照這個思路，以“實際、實用、實踐、實效”為原則，在制訂內科學教學計劃時重點選擇必須具備的基本理論知識和技能，以常見病、多發病為重點，以增強動手和分析解決實際問題能力為核心，體現崗位需要的知識。

2.2明確內科學的重要性，激發學生學習興趣

2.2.1明確內科學的地位

開始授課前向學生介紹內科學與專業課程、臨床工作的關系，以激發學生的學習興趣。讓學生明白內科學在臨床醫學中占有極其重要的地位，是臨床各科的基礎學科，所闡述的內容在臨床醫學的理論和實踐中具有普遍意義，是學習和掌握其他臨床學科知識的重要基礎。其涉及呼吸、循環、消化、泌尿、造血等系統的常見病以及理化因素所致的疾病，與外科學并稱為臨床醫學的兩大支柱學科。

2.2.2明確內科學學習的意義

內科學的教學任務和目的是：通過教學使學生掌握內科常見病、多發病的病因、發病機制、臨床表現、診斷要點和防治措施，為日后學習其他臨床學科和從事臨床實踐或基礎研究工作奠定堅實基礎。內科學是其他臨床學科的基礎，亦有醫學之母之稱。內科學是臨床醫學的核心學科，臨床醫學的共性診斷與治療思想集中表達在內科學中；且在臨床實踐中，內科疾病也最為常見，其涉及面廣，整體性強，既有自身的理論體系，又與基礎醫學密切相關，其診療原則與方法亦適用于其他臨床各科。

2.2.3明確內科學的學習方法

內科學的學習方法是通過病史詢問或面談后，進行體格檢查，根據病史與檢查所見做實驗室檢查與影像學檢查，以期在眾多鑒別診斷中排除可能性較低者，獲得最有可能的診斷，給出合理治療方案。

2.3改革教學方法和教學手段，提高學生學習積極性

2.3.1重視“三基”教學，強化教學與臨床實踐的關系

“三基”即基礎理論、基本知識、基本技能。內科學學習以疾病為中心進行講解，包括病因、發病機制、病理解剖、生理變化、臨床表現、影像學診斷方法和防治措施等。如學習“慢性支氣管炎”時，先讓學生復習支氣管的解剖和生理特點，炎癥的病理特點，咳嗽、咳痰的臨床特點及影像學特點，再進行討論并提出診斷依據，給予合理治療，從而達到基本理念與臨床知識的有機結合，為形成正確的臨床思維奠定基礎。

2.3.2重視疾病間影像診斷的鑒別

影像診斷的主要依據是圖像，通過對圖像的觀察、分析、歸納和總結作出診斷。內科學課堂教學注重啟發式和討論式教學，采取多種教學方式，以培養學生主動學習、分析問題的能力。如肺炎鏈球菌肺炎、肺結核病早期，病變部位病理改變為滲出性炎癥，影像學檢查表現為相似的X線征象，但這兩種疾病的典型臨床表現不一樣，如發熱癥狀，肺炎鏈球菌肺炎多呈稽留熱，肺結核病人多表現為長期低熱，于午后或傍晚開始，次日晨降至正常。通過對這兩種疾病的介紹，引導學生明確學習內科學的重要性和意義，使學生明確影像學檢查只是輔助檢查，必須結合臨床表現進行分析才能得出合理的影像診斷，從而為臨床醫生明確診斷提供依據。

2.3.3利用多媒體教學設備進行教學，增強直觀性

充分利用多媒體等教學手段進行教學，增強直觀性，加深學生感性認識，激發學生的學習興趣。在教學中為了增加對學生的感官刺激，彌補臨床見習中的不足，通過多媒體展示臨床病例后再進行教學。如講授“慢性支氣管炎”“肺心病”時，先以病案形式展示實例，激發學生的求知欲，使其積極參與到教學中。教學中還可通過對解剖、病理生理知識的復習來闡述疾病的演變和表現、兩種病之間的聯系、影像診斷的變化，組織學生進行討論，提出診治方案，不僅使學生產生成就感，而且提高了其分析、探索問題能力，從而收到良好的教學效果。

2.3.4強調教學總結和復習

教學中對一堂課的內容加以歸納、總結和復習，使學生明確重點，從而達到鞏固知識、加深理解的目的。課堂導入和結束的方法多種多樣，只要能提高教學效果的方法就是好方法。如教師對“肺結核”一病講授完理論知識后，就要引導學生進行總結，明確“肺結核”臨床分5型，每型的影像特征不同。

2.3.5改革考核方法，評價學生綜合能力

重視課間學習，培養學生理論聯系實際意識，從而提升學生操作技能。改革考核方法，評價學生的綜合能力，如通過病例分析引導學生注重理論知識與臨床實踐相結合，明確崗位需求、就業要求，為培養應用型人才奠定基礎。

3加強教師實踐能力和綜合能力培養

教師的能力評價對教師的業務發展具有導向作用。高職院校只有一部分教師有深入生產第一線實踐的經歷，大部分教師缺乏動手能力，不能將醫院最新技術引入教學之中。隨著經濟的發展和社會的進步，高職“雙師型”教師已成為主要的師資力量。教師應定期深入臨床，熟練掌握臨床技能，了解相關的政策、法律法規，了解社區醫療、農村衛生室崗位需求；認真備好、寫好教案，全面推進素質教育，為培養具有較強實踐能力的醫學人才貢獻力量。

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2、AP－PCR的技術方法和優缺點

2．1模板DNA提取和質量檢測

模板DNA提取的方法有很多，應根據組織的不同和試驗需要確定，但其基本的原理相同，都是通過酶或有機試劑裂解組織使核酸游離出來，然后通過有機溶劑或吸附柱純化后提取。核酸的濃度和質量可通過UV分光光度計讀取D260nm與D280nm的比值和1％瓊脂糖凝膠電泳等檢測來確定（Mohini等，2011）。目前已有很多商品化的核酸提取試劑盒可供選擇，使用方便并可得到較高質量的模板（DNA或cDNA）。

2．2隨機引物的選擇

隨機引物長度通常為10個堿基，GC的含量為60％～80％的寡聚核苷酸鏈，隨機引物不僅核苷酸的排列順序是隨機的，而且所有引物的序列無直接相關性（韋莉萍，2001）。理論上，如果1條隨機引物反應可產生x個獨立的條帶，那么a條隨機引物同時參與反應就可得到xa2個條帶，但多條引物同時參與反應會相應的增加結果的復雜性和不穩定性（Nandani等，2014）。隨機引物雖然可用于所有物種，但并不是所有的隨機引物擴增出來的結果都有意義，想要得到較為理想的結果仍需根據研究對象和研究目的進行引物的篩選和反應條件的優化，一般來說選擇能產生中等復雜度的圖譜的引物（Nandani等，2014）。

2．3AP－PCR擴增條件

AP－PCR也包括變性、退火、延伸的經典PCR過程。變性過程在94℃進行，一般來說預變性3～5min；退火溫度在35～38℃，也可根據引物Tm值來確定，一般退火溫度比引物Tm值低3～5℃；延伸溫度在72℃，在此溫度下Taq酶的合成效率約為2000bp／min（Kumari等，2013）。AP－PCR的試驗條件、模板的質量和濃度及反應體系中Mg2＋的濃度等都可能對擴增的結果產生影響，想要得到較為理想的試驗結果，反應體系的優化和試驗操作的標準化是非常重要的（Mohini等，2011；Kumari等，2013；Babu等，2014）。

2．4AP－PCR的優點

AP－PCR延續了PCR的效率高、靈敏度高、樣品用量少等優點，同時又兼有自身的優點：①不同種類的生物樣品即可使用通用的隨機引物進行基因分析（Welsh等，1991）；②可在對研究對象不了解的情況下進行基因多態性分析，從而對研究對象進行遺傳分析和分類研究（Williams等，1990；Welsh等，1991）；③對于研究對象DNA樣品量有限的情況也適用（Nandani等，2014）；④隨機引物易獲得，試驗成本低，技術容易掌握，除此之外，可對AP－PCR產生的基因條帶進行純化和克隆，以便進一步分析（Ge等，2014）。

2．5AP－PCR的局限性

AP－PCR雖然具有很多獨特的優勢，但目前仍處于應用的探索階段，其本身仍有局限性：①AP－PCR技術通常是對顯性基因標記進行分析，這就意味著不能將純合子與雜合子區別開（Babu等，2014）；②由于無明確的目的序列，如果發生擴增條帶的缺失就無法得知是什么原因導致的，不利于對擴增結果的分析（Kumari等，2013）；③AP－PCR的結果分析需要專業的帶譜分析知識，否則很難從結果中得到有意義的信息；④AP－PCR結果的重復性問題一直是限制其廣泛應用的主要原因，由于其結果受DNA模板的質量、反應體系成分和反應條件的變化等因素的影響，其擴增產物的穩定性難以控制（Mohini等，2011）；⑤AP－PCR結果通過凝膠電泳來觀察，但遷移率相同的譜帶的核苷酸同源型不明等情形易造成干擾，有時電泳遷移率相同的片段并非同源，這就給結果分析帶來很多不確定性（Nandani等，2014）。

3、AP－PCR技術研究進展

3．1AP－PCR技術自身的優化

近年來，不斷有研究者對AP－PCR技術進行改進和優化，使其更具可操作性、實用性和更廣泛的應用領域。劉剛等（2004）對AP－PCR進行了優化，建立了多重隨機引物PCR（M－RAPD）技術，M－RAPD通過使用3條組合的隨機引物在較高的退火溫度下對肺炎鏈球菌、糞腸球菌和大腸埃希菌耐藥菌株等的染色體DNA進行擴增獲得了穩定的種株特異性的DNA指紋圖，其所提供的基因信息要遠多于傳統的RAPD技術。Xiong等（2012）對AP－PCR進行了反應程序優化和隨機引物中G／（G＋C）不同比例研究，結果表明，反應程序中從退火步驟到延伸步驟的時間延長，溫度變化由3℃／s下降到0．3℃／s時，PCR產物條帶明顯增加，這可能是由于延長溫度變化的時間可提高引物與模板結合的穩定性（Fu等，2000），在比較了隨機引物中G／（G＋C）不同比例的PCR產物后發現，當G／（G＋C）比例在0．7時PCR產物的條帶最多，也更適用于進行AP－PCR反應，因此反應程序的溫度變化和隨機引物中G／（G＋C）的比例可能也是影響AP－PCR結果的重要因素。Zou等（2003）報道了利用兩步AP－PCR方法在微量DNA樣品中擴增未知序列DNA并進行克隆。第1步PCR利用29個核苷酸序列的引物進行擴增，Ran5－29（5′－GTTCTACACGAGTCACTGCA－GNNNNNNNTGGC－3′），這一隨機引物包括21個已知核苷酸序列部分，7個隨機核苷酸序列和1個3′端TGGC的卡子結構，在隨機序列前6個核苷酸序列構成了1個PstⅠ位點，其中3′端卡子結構在退火時可與含有GCCA位點結合，保證了隨機序列可與GCCA上游的序列匹配，3′端TGGC的卡子結構可使引物與模板的匹配數增加7～11個核苷酸，PstⅠ位點決定PCR產物的長度，并保留1個黏性末端，保證了克隆的順利進行。第2步PCR使用可與Ran5－29相匹配的19個核苷酸的Fix5－29（5′－GTTCTACACGAGTCACTGC－3′）作為引物，獲得的產物進行純化、克隆分析。結果表明這種策略可檢測臨床樣本DNA的最小量在1pg，克隆靈敏度達到100fg目的DNA模板。這種方法較普通AP－PCR靈敏度更高，適用于樣本量極少的臨床樣品檢測。Clem等（2007）在對比了AP－PCR方法的不同擴增策略，在此基礎上建立一種快速有效的檢測不明病原的多重隨機RT－PCR方法。在對血液樣本進行過濾后加入了DNase和RNase消化，利用宿主基因對DNase和RNase敏感而衣殼保護的病毒對其不敏感的特點，去除宿主自身基因的污染。其利用單一十聚核苷酸為引物，引物序列為（V8A2）5′－VVVVVVVVAA－3′，V＝A、G或C，3′2個A提供了一個“lock”結構，引物中不含有胸腺嘧啶脫氧核苷酸（T）可避免發生引物二聚體，但這一結構不可避免的會影響引物與模板的結合。試驗結果一旦監測到病毒的擴增產物即可通過鳥槍法克隆測序鑒定。這一方法對病毒的出現或重組進行快速監測和鑒定有很強的實用性，其檢測靈敏度達到1000克隆／mL，應用這一技術成功從血液樣品中檢測并獲得了3種獨立病毒的部分序列。

3．2以AP－PCR為基礎衍生的分子生物學技術

隨著分子生物學技術的發展，單一的AP－PCR技術已不能滿足研究的需要，因此為了克服AP－PCR的一些缺點在其基礎上衍生出包括非序列依賴單引物PCR（SISPA）、簡并核苷酸引物PCR（DOP－PCR）、DNA擴增指紋印記（DAF）、微衛星引物PCR（MP－PCR）等分子生物學技術。SISPA方法最早是由Reyes等（1991）建立起來的，其以AP－PCR為基礎，非對稱的單一引物與DNA模板的鈍末端直接連接，隨后經過若干循環的變性、退火和延伸后，模板的數量得到擴增，后經克隆、測序、分析得到基因序列。Breitbart等（2005）在SISPA的基礎上建立了DNase－SISPA聯用的方法，增加了樣品過濾和DNA酶消化等步驟，成功的從人的血液臨床樣品中發現了新的病毒基因。Djikeng等（2008）在已有研究基礎上進行了新的改進，在樣品的處理中加入RNase酶以清除外源RNA的污染如核糖體RNAs。針對有polyA尾的病毒，在反轉錄過程中加入六聚核苷酸隨機引物5′端加入一段病毒特異性引物序列，形成結合引物（FR26RV－N：5′－GCCGGAGCTCTGCAGATATC－NNNNNN－3′），同時加入連接polyT的引物（FR40RV－T：5′－GCCGGAGCTCTGCAGATATC－TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT－3′）以增加對病毒基因3′端的覆蓋率。這種在六聚體隨機引物連接一保守序列即病毒特異性引物，可增加對病毒基因5′的捕獲，從而使SISPA的成功率大大提高。DOP－PCR技術是在AP－PCR基礎上建立起來，其引物（DOP－ORI－Xho）由22個核苷酸組成，3′和5′端的特異核苷酸序列和中間的6個核苷酸構成的隨機引物組成（Telenius等，1992）。由于隨機引物的簡并性，每個反應包含著數以千對的引物。DOP－PCR的反應程序包含2個不同的部分，前5個循環引物的3′端至少有12個連續的核苷酸與模板DNA相結合，對引物和模板的匹配度要求不高，在隨后的30～40個循環里，擴增錯配的幾率會逐漸降低。初始反應產物將成為模板，用相同的引物進行擴增，擴增產物通過克隆測序即可獲得基因序列（韓燾等，2013）。Csaba等（2002）打破了DOP－PCR只用同一種引物的傳統，嘗試了5條新的可用于反應的引物，使反應時間由原來的7～8h縮短為2h，縮短了變性過程的時間，在取得理想結果的同時，減少了擴增酶的用量，提高了DOP－PCR的效率和實用性。DAF是一種改進的AP－PCR分析技術，與AP－PCR技術不同的是，DAF使用的引物濃度更高，長度更短（約5～8個堿基），在PCR反應上只包含2個溫度的循環，省去了延伸的步驟，使用聚丙烯酰胺凝膠電泳，通過銀染方法觀察結果。DAF通常會產生非常復雜的帶型，因此它所提供的譜帶信息也比AP－PCR大得多（Caetano－Anolles等，1993）。Al－hag等（2007）應用DAF鑒定8株細胞系，研究結果表明，DAF可產生穩定的可供區分的PCR譜帶。Ehsan等（2011）應用DAF技術對分離到的25株牛隱孢子蟲進行亞型的鑒定，結果發現分離的25個蟲株分屬于為3個不同的亞型。MP－PCR是以AP－PCR為基礎的分子標記技術。Ma等（1996）發現真核生物基因組中存在短串聯重復序列，又稱微衛星DNA或簡單重復序列（simplesequencerepeats，SSR）。真核生物基因組中SSR的分布是隨機的，大約每隔10～50kb就有1個SSR。SSR位點最常見是雙核苷酸重復，即（CA）n和（TG）n，每個微衛星DNA的核心序列結構相同，重復單位數目10～60個。MP－PCR的引物是與SSR位點互補的二聚或三聚核苷酸重復序列，如其引物序列可是（TA）10或（CGA）6，擴增的是SSR之間不同長度的DNA序列，將擴增產物進行凝膠電泳，根據分離片段的大小決定基因型并計算等位基因頻率（Dawson等，2013）。MP－PCR克服了AP－PCR引物的不確定性，增加了PCR產物譜帶的穩定性和針對性，該技術也已廣泛應用于物種分子標記、基因圖譜繪制和基因差異性分析等方面（Tian等，2014；Ding等，2014；Wei等，2014）。

3．3AP－PCR與其他分子生物學技術的聯用

擴增片段長度多態性（AFLP）技術是將基因組DNA先用限制性內切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DN段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點序列，作為引物結合位點（Rikalainen，2013）。針對AP－PCR結果譜帶核苷酸同源性無法確定的缺點，Tan等（2011）將AP－PCR與AFLP進行聯用，利用2種方法各自的優勢，在對可能含有未知病原的臨床樣品進行檢測，以實驗室確診的登革1型病毒為陽性對照，首先用AP－PCR對有限的樣品基因進行隨機擴增，然后使用AFLP技術對進行擴增從而得到樣品穩定的DNA多態性標記。此方法克服了AP－PCR的同源性不明問題，同時比單獨使用的AFLP方法進行檢測的靈敏度提高100倍，在臨床樣品的檢測中有很大的實用價值。高通量的測序技術也被稱為下一代的測序技術，其與AP－PCR技術的配合使用，讓AP－PCR有了更廣闊的應用前景。Hang等（2012）首先使用錨定隨機引物P17N8（5′－GTTTCCCAGTAGGTCT－CNNNNNNNN－3′）進行RNA反轉錄，在通過錨定隨機引物P17N8和P21（5′－CGCCGTTTCCCAG－TAGGTCTC－3′）同時進行AP－PCR擴增，再通過高通量的測序技術對PCR產物進行測序，對得到的基因序列進行拼接處理，從而得到了奧羅普切病毒和卡拉帕魯病毒L片段完整基因序列。vanderHeij－den等（2012）利用序列非依賴性病毒基因片段擴增方法與Roche－454測序技術聯用，成功的從患急性肝炎病犬的肝臟組織檢測出犬Ⅰ型腺病毒基因，研究結果表明AP－PCR技術和下一代的測序技術聯合使用的方法在獲得病毒完整基因序列和檢測病原等方面的實用性。

4、AP－PCR技術在動物醫學中的應用

4．1在傳染病流行病學和病原遺傳學分類中的應用AP－PCR由于其獨特的技術優勢，在獸醫傳染病學和病原遺傳學分類中已得到廣泛應用。Leh－marn等（1992）用此技術對念珠菌屬的分離菌進行分析，試驗結果表明，同一菌種的不同菌型間呈現出DNA長度的多態性；此帶型圖在同一菌種的不同菌型間，其相似程度遠大于不同種的菌株，這也說明每種菌的隨機引物PCR帶型極具特征性。Louie等（1996）用2種引物檢查15株李斯特單核菌相關流行分離株和36株不相關流行分離株。經擴增后的帶型分析，將其分為9個型，每個型中又分有不同的亞型。Zadoks等（2000）在牛乳樣品中分離到23株金黃色葡萄球菌，經AP－PCR鑒定1～8株屬于Ⅰ型菌，9～20株屬于Ⅱ型菌，其余3株分別屬于Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型菌。Butler等（2001）應用該技術對3次牛霉形體暴發流行菌株進行了檢測，結果表明，發生在其中2個養牛場的流行病原菌具有一致的指紋圖，引而具有相同的感染來源，而在另一牛場分離的菌株間則顯示了指紋圖譜的顯著異型性，說明它們具有多個感染來源。王雪敏等（2011）利用多組隨機引物對副雞禽桿菌10個國際標準株、血清C型疫苗株和4個國內分離株進行AP－PCR擴增，結果顯示，所有菌株可分為11個譜型，聚為4類。劃分的11個譜型可和現有分型方法中的不同亞型一一對應，提示這種方法可區分不同血清亞型。AP－PCR作為寄生蟲遺傳學分類鑒定的方法已得到廣泛應用，克服了傳統分類方法難以解決的問題。Macph－eson等（1993）應用AP－PCR技術區分來自不同宿主的7種艾美爾球蟲，結果表明選擇合適的引物可對7種球蟲進行鑒別。張偉信等（2003）應用該技術對雞柔嫩艾美耳球蟲不同地理株的多態性研究，結果表明不同地理株間及同一地理株親代與子代間均存在DNA多態性差異，其中不同地理株間種內變異程度較大，同一地理株子代與親代間也發生遺傳變異，但變異程度較小。

4．2在病原差異基因分析中的應用

AP－PCR技術進行RNA指紋圖譜分析不僅能鑒定基因的表達差異，而且能顯示低水平表達的基因差異。Nicho－las（2000）應用此方法鑒定了絲裂霉素C誘導下鼠傷寒沙門氏菌SOS調控基因表達的差異，結果表明，絲裂霉素C誘導后21條基因譜帶出現表達水平的上調，其中20個基因片段對應的是可辨識的基因序列，15個基因序列與數據庫中基因序列無同源性，被確定為新的表達序列，6個基因片段與SOS基因編碼的調控蛋白有關。Diana等（2005）應用AP－PCR技術對芐硝唑作用下克氏錐蟲基因表達差異多態性的研究，結果發現對芐硝唑敏感和對芐硝唑抵抗種群之間系統指紋圖譜存在一定的差異，其中可能存在克氏錐蟲對芐硝唑擁有抗性的表達機制，雖然抗性種群在芐硝唑作用下系統指紋圖譜沒有明顯的變化，但敏感種群間的系統指紋圖譜卻有著明顯的變化。AP－PCR技術為鑒定基因差異提供了一種快速有效的方法。

4．3在未知病原檢測中的應用

病原微生物引起的動物疫病呈現出復雜性和非典型性等特征，普通的臨床診斷方法很難確定病原的種類，這種情況下使用傳統PCR方法檢測臨床樣品的效率不高，而且存在漏檢可能。AP－PCR技術提供了一個更為全面、快速和靈活的檢測方法，對病原微生物進行全基因組的檢測（姚四新等，2010）。Djikeng等（2008）使用DNase－SISPA技術在牛的血清中分離到牛鼻病毒基因。Clem等（2007）利用改進的AP－PCR方法，從血液樣品中檢測并獲得了3種獨立病毒的部分序列，即腺病毒17、卡薩奇病毒A7和呼吸道合包體病毒B。周斌等（2004）在研究鴨病毒性肝炎病毒時，發現其種毒可能受到污染，隨后挑選4條隨機引物對其進行反轉錄PCR擴增，共擴增出3條基因片段。克隆測序的結果表明，與禽腺病毒（雞胚致死孤兒病毒）基因組部分序列同源性分別高達99．5％、99．6％和99．5％，從而確定了鴨病毒性肝炎病毒雞胚尿囊液種毒受到禽腺病毒的污染。黃欣梅等（2011）采用DNase－SISPA對導致鴨、鵝產蛋下降的病原基因進行擴增，并在此基礎上設計了1對特異性引物成功的擴增出新型鵝黃病毒JS804毒株基因。

篇（9）

1.1一般資料

選取腎臟內科126例泌尿系統感染的患者為研究對象，對其尿液標本行4種不同的檢查方式檢查;男性58例，女性68例;年齡23～70歲，平均(48.5±14.2)歲;發生感染時間為0.1～2個月，平均(1.2±0.4)個月。所有患者在性別、年齡及感染時間等臨床資料的比較上，差異無統計學意義，具有可比性。

1.2尿液標本的取樣

所有患者均為晨間尿液，要求患者取中段尿液為標本，尿液標本杯干凈無污染，及時送檢，以保證尿液的新鮮度。取樣時應注意①女性患者經期不進行標本取樣;②若服用藥物對尿液有影響，則在停藥7天后取樣檢測;③若尿液呈現乳糜樣，應囑患者需澄清尿液后取上層清液為標本［2］。

1.3儀器和試劑

由迪瑞醫療生產的全自動生化分析儀(CS－400B)及配套試劑;寧波醫杰公司生產的β2－MG試劑盒和Trace微量白蛋白;優利特－500B尿液分析儀及配套試紙條;奧林巴斯專業生物顯微鏡(CHK2－F－GS，雙目，1600倍);美國萬華普曼公司生產的OB試紙及消康保便血試紙。

1.4檢查方法

將126例患者的尿液標本于1h內送檢，用全自動生化分析儀進行檢測，并做單克隆隱血實驗;將標本染色后置于光學顯微鏡下行尿沉渣檢測。鏡下檢測操作為:①新鮮患者尿液標本15mL，按照1500r/min離心5min，去沉渣0.3mL，輕搖使其混合均勻后取0.02mL置于載玻片上進行顯微鏡檢測。用不同濃度的Trace微量白蛋白進行單克隆抗體隱血實驗的靈敏度實驗。

1.5結果判定標準

鏡檢結果和尿分析儀結果以紅細胞(RBC)＞3/HP為(+)，單克隆抗體隱血實驗以試紙上顯現兩條明顯紅線為(+)。

1.6統計學分析

采用SPSS14.0軟件進行數據處理，計數資料采用t檢驗，計量資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2結果

所有患者的尿液標本用4種方法行檢查后，結果顯示:全自動生化分析儀檢測RBC(+)為36例;尿沉渣鏡檢RBC(+)為32例;β2－MG(+)為13例;單克隆抗體隱血實驗(+)為45例;以鏡檢結果為標準，各檢查方法準確率分析比較。

3討論

3.1選擇性尿液標本β2－MG檢查

β2－MG在尿液中的測定結果對診斷腎小管或腎小球疾病具有重要意義。人體內的β2－MG濃度穩定，在腎小球的濾過作用中極易通過腎小球濾過膜，然后在腎小管中分解成氨基酸［4］。當腎小管發生病變時，重吸收功能降低，尿液中β2－MG濃度升高;反之，若腎小球發生病變時，即使腎小管重吸收作用良好，尿液中的β2－MG仍會呈現出正常水平或輕度升高。所以，β2－MG在尿液中的測定對了解腎小管或腎小球的病變情況有促進作用。

3.2選擇性尿液標本全自動生化分析儀檢查

尿液標本全自動生化分析儀對RBC計數的準確度和精密度有明顯的提高，但是其在臨床運用中存在干擾因素過多、特異性差及敏感性高的缺點。當尿液中的結晶、細菌、以及真菌等粒子均會使檢查結果中RBC呈現(+)，提高了假(+)率。全自動生化分析儀對RBC的計數是通過其散射光和熒光強度來進行的，而尿液中的結晶、細菌、以及真菌等粒子規格類似于RBC，尤其是熒光強度平均值升高時，RBC的假(+)率升高，若RBC的熒光脈沖寬度同時增大，即能確定RBC呈現假(+)［5］。研究中全自動生化分析儀檢測RBC(+)為36例，尿沉渣鏡檢RBC(+)為32例，假陽性呈現率為12.5%;尿液中RBC分解后，全自動生化分析儀無法對其計數，檢查結果呈現(－)，就造成了假(－)率升高，需借助其他檢查方法才能確定。

3.3選擇性尿液單克隆抗體隱血實驗

篇（10）

病理內窺鏡標本一般包括胃鏡、腸鏡標本，喉鏡、氣管鏡標本及膀胱鏡標本。這類活檢組織標本較小，使用常規石蠟制片技術，需要3～4天完成制片，在病人急需手術或治療時，常因等待病理報告時間過長而耽誤臨床診治工作。為此，我們將微波技術應用于內窺鏡標本的制片中，只需1～2小時就完成制片，極大提高了工作效率，且制片質量近似于常規石蠟制片技術，完全符合病理診斷的要求。

1材料與方法

1.1材料選取內窺鏡活檢標本100例，其中胃鏡標本40例，腸鏡標本40例，喉鏡標本20例。要求組織塊小米粒大小，便于固定脫水。

1.2儀器設備三星STG88型微波爐一臺。輸出功率800W，分六級調節（800W、600W、450W、300W、180W、100W）。

1.3所用藥液①固定液：95%乙醇，無水乙醇。②透明液：按質量比3:1配制的硬脂酸-石蠟液態混合物。③Harris蘇木精染液。

1.4微波制片①將組織放入盛有5ml95%乙醇的青霉素小瓶內，用兩層紗布及布繩將瓶口封好，用450W功率微波輻射30秒，至乙醇沸騰。②取出小瓶，將剩余液體倒掉，換成5ml無水乙醇，用450W功率微波輻射30秒。③倒去無水乙醇剩余液體，用硬脂酸-石蠟液態混合物透明，用450W功率微波輻射4～5分鐘。④用熔點為56～58℃的液態純石蠟浸蠟，450W微波輻射5分鐘。⑤組織包埋、切片：包埋時盡量用最小的模具，把所有組織包在一個平面上，切片時待多個組織充分暴露時再切，爭取選擇多個切面，切片厚4～5μm。⑥用微波烤片：450W微波輻射3分鐘。

1.5微波HE染色①切片常規方法脫蠟、脫苯、水洗，經微波烤片后，脫蠟時間減少至5分鐘，脫苯時間也相應減少，水洗時間正常。②吸Harris蘇木精染液3～4滴滴于切片上，完全覆蓋組織，用600W微波輻射30秒，水洗。③1%鹽酸酒精分化1～3秒，碳酸鋰飽和溶液藍化至切片泛藍后水洗1分鐘。④伊紅染色，梯度酒精脫色，中性樹膠封片，鏡下觀察。

2討論

篇（11）

衛生服務作為特殊的服務行業，其管理方式千差萬別，但隨著醫療體制改革的不斷深入，衛生服務行業的管理模式正在趨于統一。作為衛生服務主體的醫院等機構擁有大量的患者、醫生、護士等工作人員，裝備了大量的先進儀器設備，每天處理大批業務，產生了龐大的信息，醫院一直是當前醫學信息潮流中最活躍的領域。隨著計算機和網絡性能的提高，計算機技術已經在衛生服務行業中發揮著極大的作用，尤其實在醫院的醫療、教學、科研、管理、等各方面得到越來越廣泛的應用。醫療服務機構的醫學信息化管理程度不斷提高，三級以上醫院全部實現了醫學信息的計算機管理。各種衛生醫療機構和管理部門也都采用了對醫學信息的計算機管理。

1.2教育特點

高等職業教育中，衛生職業院校的培養目標是主要是使求學者獲得衛生職業或職業群所需的實際能力(包括技能和知識等)，提供通向醫療衛生職業的道路。因此培養學生的實踐技能操作時培養的重點方向。實踐技能不僅包括醫學相關的實踐技能，還包括對計算機技術的使用和醫學信息計算機技術的熟練使用。而當下大部分衛生類院校沒有開設專門的醫學信息計算機相關課程，學生在進入工作崗位前需要單獨進行相關的崗前醫學信息計算機技能的培訓，才能進入工作崗位。由此可見在醫學院校和衛生職業學院開設醫學信息計算機技術課程已經迫在眉睫。

1.3計算機教學

衛生職業學院的計算機教學現今仍以計算機基礎知識為主要教學內容，一般學時為54學時，主要講授計算機基礎知識、網絡基礎知識、Office辦公自動化等方面內容。在實際的教學過程中發現許多學生在中學時代的計算機課程中已經學會了上述大部分知識，教學存在重復性，同時也無法突出衛生職業學院的特點，和醫學專業的特點。不能實現與醫療衛生服務機構的崗位需求無縫對接。因此在衛生職業學院等衛生類院校開設醫學信息計算機課程，已經成為了目前迫切需要解決的問題

2醫學信息計算機應用技術和醫學信息系統

2.1醫學信息計算機應用技術

醫學信息計算機應用技術是一門以醫學信息為主要探究對象，以醫學信息的運動規律及應用方法為主要探究內容，以現代計算機為主要工具，以解決醫藥工作者在處理醫學信息過程中的各種問題為主要探究目標的一門新興學科，是一門介于醫學、計算機科學與信息學之間的交叉學科，應用性強有不乏自身基礎理論的探究。

2.2醫學信息系統醫學信息系統

涵蓋整個與醫療、衛生有關的信息加工、傳遞、存儲以及利用等相關的信息系統，包括公共衛生信息系統、醫療服務信息系統（主要由醫院信息系統組成），衛生行政管理信息系統所組成。

3教學計劃和實施方案

3.1教材選擇

醫學信息計算機應用技術作為一門新興學科，目前可供選擇的教材較少，推薦使用以下教材：（1）《醫學信息計算機應用技術》，高等教育出版社。該教材也是全國醫學信息技術人才培養工程教材、全國醫學信息技術考試管理中心崗位技能考試的制定教材。（2）《衛生信息學》，衛生出版社。

3.2教師培訓

原有的衛生職業學院的計算機課教師和實驗教師可以參加全國醫學信息技術考試管理中心的培訓，考試后獲得相關的從業資格。同時鼓勵教師到醫院等醫療衛生服務機構進修，參觀、學習，了解醫學信息計算機技術的實際應用，更好地實現教學目標。3.3教學計劃在第一學年即可開設，建議設54學時，其中理論12學時，實踐42學時。同時針對不同專業制定不同的教學計劃。

3.4教學目標及其具體實施方案

衛生職業院校開設的專業較多，以我院為例，開設了護理、口腔醫學技術、醫學檢驗技術、藥學、康復治療技術、醫學營養、公共衛生管理等專業。不同的專業學生學習的專業課程完全不同，日常使用和管理的醫學信息也不盡相同，可以針對專業開設不同的課程。如護理專業學生重點介紹門診護士和住院護士的醫學信息計算機技術的使用。藥學專業學生重點學習藥房（藥局）的計算機管理系統。檢驗專業重點學習醫學、衛生檢驗、檢疫實驗室的醫學信息的管理。根據不同的專業突出不同的側重點，在教學中可以分專業教學，從而達到醫學信息計算機技術的學習目的。下面以護理專業學生為例介紹教學目標及其具體實施方案。護理專業學生可根據學習方向重點學習醫院信息系統的門診護理工作站、住院護理中心和社區衛生服務機構等衛生服務機構的醫學信息管理系統軟件的使用。以住院護理中心的計算機管理中，住院護士應具備以下醫院信息系統的計算機操作能力，如表1，表2所示。

3.5改變教學實施策略，改革教學方式

結合醫學信息管理系統軟件的操作采用以實訓教學為主的教學、考核方式。改革考試方式，采用實踐技能操作的考試方法，模擬醫院的科室設置，安裝醫院信息計算機管理系統，同時設置掛號室、收款室、醫生診室、藥局、門診處置室等部門，由不同專業學生扮演患者、掛號護士、收款人員、門診醫生、藥局藥劑師、門診護士，分組進行操作，完成整個門診操作流程。同時鼓勵參加全國醫學信息計算機應用技術認證考試。使學生畢業時獲得雙證。